形态学科研基础1B.ppt

第三部分 形态测量学 概述 生物形态定量分析是利用特制测试格、线对待测结构进行二维图像测量，求出特征物的面积、长度和数目等，再根据二维图像与三维结构的数学关系进行计算，最后得出特征物的三维结构参数。 特征物断面的定量特征，可较准确地、间接地反映其三维的定量特征。特征物的形态定量特征，包括度量特征（如体积、表面积、高度、长度、厚度、平均曲率等）和拓扑特征（如粒子或轮廓面数目等）。拓扑是指与度量特征无关的、不受任意连续变形（如伸缩、肿胀、皱缩等）所影响的特征。 形态定量分析结果的准确性，不仅取决于准确地测量特征物和精确地运算获得的结果， 而且也取决于测量组织图像质量的好坏、 抽样方法的正确与否，以及切片组织的变化大小等。因此，减少定量分析结果与真实值之间的误差，准确地和客观地反映特征物，才是形态定量研究的目的。 常用测量工具包括： 显微刻度尺、目镜测试格、 图像测试格等 测试格的类型及选择 网状方格 测试面积 测试线 测试点 d—小方格边长 L2=2d·P A=d2·P 关联短线测格 测点、测线 测面之间的 关系： L=d/2·P A=d2·P 平行等距直线测格 测线与测点的关系： L=d·P 通常在所有切片的所有测试视野内，特征物的计数或测试项目（如点计数、长度测量、特征物计数等）的总数，不必超过200个。 基本测量 1 点计数（分测点计数和交叉点计数） 2 特征物计数（包括轮廓面计数和粒子计数） 禁线法则（禁线为下、左两线，计数线为上、右两线） 长度测量 1 费莱特直径 (d1+d2)/2 常用形态特征描述参数： 1 总面积 一幅图象中所有细胞面积之和 2 参考面积 所定义测量的面积 3 面积百分比（面密度） 总面积与参考面积之比 4 场数目 一幅图象中细胞的个数 5 平均空间距 细胞间的平均距离 图象分析系统的操作基本步骤： 1 系统操作程序的调试（如定义测量窗口、调亮度、调灰度、测背底等） 2 图象采集 3 图象存档 4 图象测量（自动测量、手动测量） 5 选定细胞或结构的确认 6 数据分析（数据方式、直方图方式） 7 定量资料、统计资料的打印 定量分析的影响因素 一 误差分析 1 过失误差（测量、记录、计算） 2 测量误差（属于随机误差） 3 系统误差（包括测试工具误差、图象失真误差、抽样不随机误差等） 4 抽样误差 定量分析的影响因素 二 切片组织变化的影响（组织皱缩、切片压缩、组织变化的影响） 三 切片厚度的影响（景深） 形态学科研设计注意事宜 1 对所要开展的形态结构研究的领域要有一个较全面的了解 形态结构研究定量是必然趋势。各研究领域有其特殊的要求，但多数是将特殊染色与计算机图象分析技术结合进行，可通过面积、数量、形态、比色等定量指标进行实验组间或组内比较，并客观给出结构参数和统计图表等。 1 对所要开展的形态结构研究的领域要有一个较全面的了解 如需开展形态结构定量研究，就必须首先对本专业研究领域的相关进展情况有较充分的了解。同时，还要对研究对象的结构定量研究的可靠性与可行性进行评估，有条件的必须先做预实验。为随后的工作奠定良好的基础。 2 所选研究对象是否具有说服力、代表性和技术上的可行性 说明形态学变化的结构定量指标应具有研究操作上的可行性，以及同类研究间的可比性。使定量描述的内容具代表性，如肝脏的功能是由肝细胞实现的，所以肝细胞的形态、数量和代谢水平的定量变化就具代表性。 如以研究某器官毛细血管腔或肺泡腔的体积变化，来论证所在器官的病理改变和功能问题，就有很大的变异性和不确定性，因为影响毛细血管腔或肺泡腔的体积变化因素很多，其中组织灌注固定不均、切片时的组织挤压和生理性肺组织收缩等因素都能造成的随机取样时误差偏大。所以，这类研究在可行性方面多采用管壁厚度测量，或测定管腔变异系数。 3 保证所选取的样本具有无偏、随机性 取材时应避免人为的有选择性取材的做.事实上如果组织细胞间的差异确实存在，只要遵照科学的无偏和随机取材，阳性结果是会反映出来的。如果组间差异不显著或标准误差过大，只能通过增加样本量来解决。无偏和随机取材的正确做法是：把要取材的器官切分为多个小组织块，再对它们进行编号，