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关于阿那曲唑对乳腺癌组织c myc 表达的影响 【摘要】目的：探讨阿那曲唑对初次罹患乳腺癌患者癌组织c myc 表达的影 响. 方法：在患者知情情况下，行乳腺癌切除术前3 d 到1 wk，获取40 例患 者部分肿瘤组织后，对患者施予阿那曲唑治疗. 手术过程中获取肿瘤组织. 将 肿瘤组织研磨后，Western Blot 分析乳腺癌组织中c myc 的表达. 同时免疫 组化检测乳腺癌组织雌激素受体表达情况. 并用ELISA 方法检测患者治疗前后 血清中的雌二醇水平. 结果：40 例患者中，雌激素受体阳性患者为28 例，占 70%. 经阿那曲唑治疗后，雌激素受体阴性患者c myc 表达无明显变化 （P0.05）；雌激素受体阳性患者c myc 表达有显著变化(P0.05)，其中23 例患者c myc 表达明显降低，2 例没有变化，3 例升高. 阿那曲唑能够降低所 有患者的外周血雌二醇的水平. 结论：对于绝经后的乳腺癌雌激素受体阳性患 者，阿那曲唑能够有效地降低癌基因c myc 的表达， 从而降低癌细胞的转移 性. 【关键词】乳腺肿瘤 阿那曲唑 原癌基因蛋白质c myc 0 引言 乳腺癌是临床上妇女最常见的恶性肿瘤之一. 70%乳腺癌细胞膜表面有雌激 素或者孕激素受体表达， 为激素敏感性肿瘤［1-2］. 所以近年来，除了传统 的化学治疗外，内分泌辅助治疗乳腺癌也得到了长足的进展［3］. 作为新型的 辅助治疗药物，阿那曲唑已被证实在降低肿瘤的转移性等诸多方面优于传统的 三苯氧胺［4］. 但是在体情况下，阿那曲唑对肿瘤的作用尚不明了. 本研究针 对乳腺癌重要的癌基因产物c myc 进行探讨，发现阿那曲唑能够有效地降低 乳腺癌细胞c myc 的表达， 从而降低癌细胞的转移性. 1 对象和方法 1.1 对象收集2006 03/2006 08 行乳腺癌手术的绝经乳腺癌患者40 例， 中位年龄62 (54~68)岁. 所有患者均签署知情同意书. 按照1 mg/d 剂量在术 前3~7 d 服用阿那曲唑. 阿那曲唑(瑞宁得)为阿斯利康公司产品(1 mg/片). 临 床应用方式为口服. 抗雌激素受体多克隆抗体，抗GAPDH 多克隆抗体及辣根过 氧化物酶标记羊抗兔多克隆抗体均购自DAKO 公司. 化学发光检测试剂盒购自 Roche 公司. 雌二醇（E2）检测试剂盒购自晶美公司. 1.2 方法 1.2.1 免疫组化检测乳腺癌组织雌激素受体的表达患者服用阿那曲唑前及 手术当中，分别手术获取绿豆大小肿瘤组织，经40 g/L 甲醛固定后，常规石蜡 包埋，4 mm 厚度连续切片，脱蜡至水，30 mL/L 过氧化氢溶液室温下作用30 min，用蒸馏水冲洗，PBS 浸泡5 min. 于枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0） 80℃孵化 10 min. 每张切片加5 mL 100 mL/L 山羊血清封闭10 min，滴加50 mL （1 ∶ 500 稀释）兔抗雌激素受体a 链多抗，37℃反应60 min，PBS 冲洗3 次，每次5 min. 滴加辣根过氧化酶标记二抗溶液，37℃反应30 min，其后用PBS 冲洗3 次，每次5 min. 滴加100 mL 新鲜配制的DAB 溶液显色，镜下观察显色反应， 显色适度时以自来水终止反应. 苏木精衬染，中性树胶封片，电镜观察. 1.2.2Western Blot 检测乳腺癌组织c myc 的表达将组织直接研磨后， 加入上样缓冲液100℃沸煮5 min. 灌制SDS PAGE 电泳胶，将同一份样品等 分3 份，每份再等分两份后上样，电泳. 用电转移装置将蛋白转至PVDF 膜上. 电转移完毕后，取出膜，用TBS 洗涤1 次. 将膜放入封闭液，4℃封闭过夜. 用 封闭液稀释抗c myc 和抗GAPDH mAb 至1~10 mg/L，与含有目的蛋白条带膜 在室温作用1 h. TBS 洗膜4 次，每次15 min. 按试剂盒说明书稀释酶标记二 抗，与膜于室温作用30 min. TBS 洗膜4 次，每次15 min. 按试剂盒说明书混 合发光液A 和B，与膜作用1 min 后进行X 光片曝光. X 光胶片曝光后，在激光 光密度图像扫描仪上扫描得光密度值. 参照等分样品的GAPDH，进行半定量分 析. 1.2.3ELISA 检测乳腺癌患者血清中雌二醇水平收集患者阿那曲唑治疗前后 血清并冻存于-70℃，集中检测前4℃缓慢解冻. 将血清加入试剂盒，37℃作用 1 h，PBS 洗涤3 次，每次5 min. 按试剂盒说明书稀释HRP