酒精技术-41发酵.pptVIP

第二章 发酵液的预处理及菌体的回收 预处理和菌体回收 发酵液成分很复杂，包含菌（细胞）体，胞内外代谢产物，及剩余的培养基残分等。 不管人们所需要的产物是胞内还是胞外，都首先要进行培养液的预处理和固液分离开，才能进行后续操作： 对于胞外产物，可先将菌体或其他悬浮杂质去处，才能从澄清的滤液中提取代谢产物。 对于胞内产物，首先富集菌体，再进行细胞破碎和碎片分离，然后提取胞内产物。 发酵液的预处理 为何要对发酵液进行预处理？ 固液分离方法主要是过滤和离心。 对于细菌及某些放线菌，菌体细小，液体粘度大，不能直接过滤，若用高速离心，能耗很大，设备昂贵。若用膜分离技术（如微滤）易产生膜污染，通量降低。 发酵液中由于菌体自溶，核酸、蛋白质及其它有机粘性物质的存在也会影响固液分离。 因而寻找一种经济有效的方法(发酵液预处理)来提高固液分离速度显得十分必要。 预处理的目的 预处理的目的：促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离的效率： ⑴改变发酵液的物理性质，包括增大悬浮液中固体粒子的尺寸，降低液体黏度。 ⑵ 相对纯化，去除发酵液中的部分杂质（高价无机离子和杂蛋白质），以利于后续各步操作。 ⑶尽可能使产物转入便于后处理的一相中（多数是液相）； 预处理的方法 ⑴凝聚和絮凝 ⑵加热法 ⑶调节悬浮液的PH值 (4)使用惰性助滤剂 一凝聚和絮凝在发酵液预处理中的应用 凝聚与絮凝处理过程就是将化学药剂预先投加到悬浮液中，改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，破坏其稳定性，使其聚集起来,增大体积以便固液分离。 凝聚和絮凝技术常用于菌体细小而且黏度大的发酵液的预处理中。 凝聚和絮凝是两种方法，两个概念。 凝聚：指在投加的化学物质（铝、铁的盐类）作用下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成１ mm 大小块状凝聚体的过程。 机理：利于凝聚剂有些是对初始离子表面电荷的简单中和；有些是消除双电荷层而脱稳；还有些是通过氢键或其他复杂的形式与离子结合而产生凝聚。 絮凝：指使用絮凝剂（天然的和合成的大分子量聚电解质）将胶体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。其中絮凝剂主要起架桥作用。 1）加热降低液体粘度 液体黏度是温度的指数函，升温是降低黏度的有效措施数。 2）加热使蛋白质变性凝固 变性蛋白质的溶解度小。如柠檬酸发酵液加热至80℃以上，可使蛋白质变性凝固，过滤速度加快。 加热处理只适用于对热较稳定的液体。注意加热温度与时间，不影响产物活性和细胞的完整性。 pH值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质，适当调节pH值可改善其过滤特性，一般采用无机酸或草酸及碱来调节。 细胞(碎片)及某些胶体物质在某个pH值下也可能趋于絮凝而成为较大颗粒，有利于过滤的进行。 调节发酵液的pH到蛋白质的等电点是除去蛋白质的有效方法。大幅度改变pH还能使蛋白质变性凝固。 通过调整pH值改变膜过滤中易吸附分子的电荷性质，可减少膜堵塞和污染； 影响离子型絮凝剂的电离度。 发酵液的固液分离（菌体回收） 固液分离的目的包括两方面： 收集胞内产物的细胞或菌体，分离除去液相， 收集含生化物质的液相，分离除去固体悬浮物（细胞、菌体、细胞碎片、蛋白质的沉淀物和它们的絮凝体等）。 常见的固液分离方法 过滤 filtration 离心 Centrifugation 膜分离 membrane separation 双水相萃取 ATPS 扩张床吸附 EBA （一） 过 滤 filtration 过滤操作是借助于过滤介质，在一定的压力差ΔP作用下，使悬浮液中的液体通过介质的孔道，而固体颗粒被截留在介质上，从而实现固液分离的单元操作。 过滤介质filter medium : 过滤采用的多孔物质； 滤浆filter pulp : 所处理的悬浮液； 滤液filtrate : 通过多孔通道的液体； 滤饼或滤渣 filter cake:被截留的固体物质。 根据过滤机理的不同，过滤操作可分为澄清过滤和滤饼过滤两种。 澄清过滤:将过滤介质填充于过滤器内构成过滤层，当悬浮液通过滤层时，固体颗粒被阻拦或吸在滤层的颗粒上，使滤液得以澄清，这种方法叫做澄清过滤。 过滤介质：硅藻土、砂、颗粒活性炭、玻璃珠、塑料颗粒等，也有用烧结陶瓷、烧结金属、粘合塑料及用金属丝绕成的管子等组成的成型颗粒滤层。 适合于固体含量少于0.1g／l00ml、颗粒直径在5～100μm的悬浮液的过滤分离，如河水、麦芽汁、酒类和饮料等的澄清。 过滤推动力： 悬浮液自身压强差、重力 悬浮液的—外加压力 过滤介质的—抽真空 离心力 过滤阻力： 介质阻力：可视为平变，且一般过滤初较明显 滤饼阻力: 滤饼厚度：随过滤进行而增加 滤饼特性：颗粒形状、大小。 大多情况下，过滤阻力主要取决于滤饼阻力。 （二） 错流过滤 又称切向流