2011CB504700-重要病毒跨种间感染与传播致病的分子机制研究剖析.doc

项目名称： 重要病毒跨种间感染与传播致病的分子机制研究 高福 中国科学院微生物研究所 2011.1至2015.8 中国科学院  本项目根据，聚焦国际上病毒病研究的，立足于我国重要病毒性传染病流行，选择冠状病毒、和病毒对我国具有严重危害或潜在危害的代表性病毒为主要研究对象，运用病毒学、分子生物学和结构生物学等手段，形成具有国际竞争力的团队，尼帕或类似副粘病毒弄清楚SARS病毒直接动物溯源和生态传播链；明确高致病性禽流感病毒主要疫源地（青海湖流域、洞庭湖）生态的分布、储存方式、生存及消长规律尼帕或类似副粘病毒确定登革病毒在蚊子细胞中复制所必须的5’UTR和3’UTR顺势作用元件，鉴定出在登革病毒复制过程中起重要作用的种属特异顺势作用元件和细胞因子。部分新型冠状病毒的受体型冠状病毒跨物种感染的；形成具有国际竞争力的团队， 三、研究方案 学术思路: 本项目立足于我国重要病毒传染病通过本项目，一支在病毒研究领域具有国际竞争力的优秀团队，为应对突发公共卫生事件、构筑公共安全体系、保障人民健康提供技术支撑。  四、年度计划 研究内容 预期目标 第 一 年 采集蝙蝠样本500份；家畜样本500份； 获得流感病毒、新型冠状病毒、乙脑病毒等的分离毒株和序列；获得分离毒株的致病性和传播性特点。 获得不同基因型的乙型脑炎病毒、登革病毒、流感病毒囊膜蛋白；获得部分囊膜蛋白的晶体结构。 对病毒目的基因进行定点突变，观察病毒突变株和野生株对不同宿主细胞及不同组织来源细胞中复制能力的差别，寻找决定病毒在不同种属宿主细胞中复制的关键位点。 筛选出5-10种分别与流感病毒、汉坦病毒及狂犬病病毒蛋白相互作用的宿主细胞因子。 获得人HLA-A2/DR1和HLA-A11/DR1转基因小鼠。完成5-10株高致病性禽流感病毒、狂犬病毒等新型病毒的生物学特征鉴定，获得至少4株具有不同神经嗜性新型病毒。 发表研究论文10篇以上 第 二 年 获得10株以上病毒的部分基因组序列； 确定新型病毒与人类病毒在在血清学和基因序列上的差异。 获得流感病毒、新型冠状病毒、乙脑病毒等的分离毒株和全基因组序列；获得流行毒株的遗传变异规律和生物学特性；建立病毒的反向遗传操作系统1套。 获得乙脑病毒、登革病毒细胞候选受体；获得一些影响流感病毒HA蛋白与唾液酸受体的重要蛋白残基；初步了解流感病毒如何影响细胞自噬的信号通路。 获得目的重组病毒；建立人冠状病毒库；揭示不同突变对病毒RNA翻译和复制的影响；获得宿主细胞miRNA与病毒miRNA表达谱。 筛选出2-6种分别与流感病毒和汉坦病毒相互作用的宿主限制性因子；阐明部分宿主限制性因子对流感病毒和汉坦病毒复制的影响及其作用机制；获得狂犬病病毒感染前后宿主在蛋白质水平的差异点 明确高致病性禽流感病毒对在HLA-A2/DR1、HLA-A11/DR1转基因小鼠体内感染特性，初步揭示MHC限制性在高致病性禽流感病毒跨物种感染过程中的作用；完成新型病毒的基因组测序，利用生物信息学方法并发现嗜神经性相关毒力位点，通过反向遗传学手段进行验证。 发表研究论文20篇以上 第 三 年 获得3-5株新分离病毒的全基因组序列；揭示野生动物或家畜冠状病毒的遗传变异情况。 建立病毒的毒株库和基因库；确定影响病毒致病性和传播性的关键基因位点。 获得1-2个乙脑病毒、登革病毒受体或辅助受体；从分子结构水平揭示流感病毒HA蛋白与唾液酸受体相互作用影响流感病毒跨种间传播的机制；阐明流感病毒表达蛋白如何影响细胞自噬水平。 揭示病毒在不同宿主上生长能力的动态变化；获得人冠状病毒感染性克隆；获得四种病毒RNA上的细胞蛋白因子。 深入阐明宿主限制性因子在流感病毒及汉坦病毒复制过程中的调控机制；筛选出1-2个与狂犬病病毒相互作用的宿主限制性因子。 通过转基因技术获得流感病毒体内分布实时监测动物模型；通过细胞学和动物学实验，初步阐明新型病毒嗜神经性相关毒力位点的作用机制 发表研究论文20篇以上 第 四 年 揭示蝙蝠、啮齿类动物、食虫目动物在病毒跨种群传播的关键基因序列； 初步弄清楚我国犬流感病毒的可能的来源。 丰富病毒毒株库和基因库；阐明新型病毒的基因和生物学特点；确定病毒非编码区的功能位点。 获得重组表达的受体蛋白；阐明病毒囊膜蛋白与受体直接的相互作用能力。 揭示病毒在体内不同部位的复制能力的差别；揭示病毒突变株和野生株对不同种属细胞感染，复制能力的差别；分析影响病毒在宿主中复制能力的结构基础。 阐明不同种属宿主细胞限制性因子对流感病毒和汉坦病毒感染及致病的分子基础和调控机制；确定狂犬病病毒结构蛋白中哪种成分在影响宿主限制性因子方面发挥主要作用 完成高致病性禽流感病毒在小鼠体内的感染动力学研究，揭示高致病性禽流感病毒在哺乳动物体内的组织嗜性和感染过程；通