纳子法电针治疗对哮喘模型豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡的影响_论文.docxVIP

纳子法电针治疗对哮喘模型豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡的影响 作者：蔡彦，陈文裕，陈创荣，揭西娜，余瑾 【摘要】【目的】观察纳子法电针治疗对哮喘模型豚鼠嗜酸性粒细胞（Eos）凋亡的影响。【方法】将４８只豚鼠随机分为４组：申时（１５：００～１７：００）电针组、巳时（９：００～１１：００）电针组、模型组及正常对照组；除正常对照组外，其他组均采用鸡卵清蛋白复制哮喘模型，治疗组分别于不同时段取定喘、肺俞、经渠穴电针治疗；采用苏木素—伊红（ＨＥ）染色法和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（ＴUＮＥＬ）法，检测Eos计数及肺组织中Eos凋亡率。【结果】模型组Eos计数显著性升高（Ｐ＜０.００１）,Eos凋亡率无显著性变化；申时电针组和巳时电针组Eos计数均显著性降低（Ｐ＜０.００１），Eos凋亡率均显著性升高（Ｐ＜０.００１），其中申时电针组２项指标优于已时电针组（Ｐ＜０.０５或Ｐ＜０.００１）。【结论】按时辰取穴的纳子法电针治疗哮喘的疗效优于不按时辰治疗者，其机制可能与降低模型豚鼠气道的Eos计数与凋亡率有关。 【关键词】哮喘／针灸疗法；纳子法；肺组织／病理学；细胞凋亡；疾病模型，动物；豚鼠 目前哮喘的发病率和死亡率呈逐年上升态势，如何更有效地治疗哮喘成为全球医学界的一大难题。中医学采用针灸手段治疗哮喘疗效确切［１］，其中纳子法是中医时间医学代表的一种经典针灸方法，强调不同时辰脏腑气血盛衰状况不同，针灸效应亦不同。有学者［2］认为子午流注纳子法的优越性就在于强调选择针灸时间的同时亦强调选取适当穴位,从而最大限度地发挥穴位的效应。但目前尚未见运用纳子法电针治疗哮喘的相关报道。本实验观察纳子法电针治疗对哮喘模型豚鼠的治疗效果，以进一步明确其治疗机制，现报道如下。 1材料与方法 动物及分组健康豚鼠48只（由中山大学实验动物中心提供，编号0018507），体质量350～400g，雌雄各半，随机分为4组：申时电针组（A组）、巳时电针组（B组）、模型组（C组）和正常对照组（D组），每组12只。 主要试剂与仪器鸡卵清蛋白（Sigma产品，批号：A5503）；多聚甲醛（天津百世化工，批号：915）；脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）试剂（Chemicongoncan公司产品，批号：S7100）；电针机（SLT-B型全信息电针治疗机）；超声雾化器（粤华WH-2000，粤汕）；定量分析生物显微图像光学处理系统（南方医科大学病理教研室提供）。 模型复制［3］A、B、C　3组动物均以100g/L鸡卵清蛋白液1mL腹腔注射致敏。致敏后第7天将3组动物置特制激发箱内，以10g/L鸡卵清蛋白溶液喷雾激发，按个体差异每次2～10min,直至“哮喘”发作（点头呼吸）,连续5d。正常对照组以等容积生理盐水代替。 纳子法电针治疗造模成功后Ａ组于肺经昼夜气血盛衰的峰值申时（15：00～17：00），Ｂ组于肺经昼夜气血盛衰的非峰非谷值巳时（9：00～11：00），取定喘、肺俞、经渠穴电针治疗（取穴方法参照《实验针灸学》［4］）。每次治疗10～15min，1次/d，6d为１疗程，共治疗2个疗程。 病理学检查末次喷雾激发后第2天，各组动物麻醉后取出右肺，标本用100g/L多聚甲醛固定，从固定部位切取右肺组织块。 肺组织中嗜酸性粒细胞（Eos）计数及Eos凋亡率测定切片分别做常规苏木素—伊红（HE）染色和TUNEL标记。原位凋亡标记方法参考试剂盒说明及文献［5］。凋亡阳性细胞核呈棕黄或棕褐色，与同一来源的组织HE染色对照，鉴别为Eos。细胞计数方法为在显微镜下每张切片分别连续数10个高倍视野（×400）的Eos（HE染色）和凋亡Eos（TUNEL原位凋亡标记）总数，计算凋亡细胞所占相应细胞的百分比即为Eos凋亡率。 统计学处理采用进行多个样本均数间两两比较的q检验。 2结果 染色法观察图1结果显示，肺组织切片正常对照组支气管及肺泡结构正常，几乎没有Eos。模型组的细、小支气管管壁和伴行动脉周围有较多的Eos、浆细胞和淋巴细胞浸润，同时可见支气管黏膜皱壁增多、基底膜增厚、平滑肌增生、管腔缩窄或被黏液栓和炎性细胞闭塞等现象。两治疗组炎性改变不及模型组的变化明显。巳时治疗组的肺泡发现有中量的Eos、浆细胞和淋巴细胞浸润的炎症渗出，较少发现有明显的支气管基底膜增厚、平滑肌增生、管腔狭窄、或者被黏液栓和炎症细胞闭塞等现象。而申时治疗组只有少量到中量的炎症渗出，肺泡结构较为清晰，未发现有明显的支气管基底膜增厚、管腔狭窄或者被黏液栓和炎症细胞闭塞等现象。 染色法观察图2结果显示，两治疗组中Eos的TUNEL阳性细胞数相对增多；模型组Eos