GRIM-19及其截断体原核表达载体的构建及表达与纯化.pdfVIP

中国实验诊断学 2O12年 2月 第 16卷 第 2期 文章编号 ：1907--4287(2012)02--0191--04 GRIM一19及其截断体原核表达载体的 构建及表达与纯化 王青元，朱 靖 ，周 颖，许乾乾 ，朱圆圆，凌 斌 (安徽医科大学附属省立医院 妇产科分子实验室，安徽 合肥 230001) 摘要 ：目的 构建 GRIM一19及其截断体原核表达载体 ，在大肠杆菌 中诱导表达并纯化融合蛋 白。方法 用 RT- PCR法从 HeLa细胞 中扩增 出带 BamHI、XhoI酶切位点的GRIM一19及其截断体基 因片段 ，将 GRIM一19及其截断 体基因片段克隆到 pGEX-4T-3原核表达载体上 ，在大肠杆菌 中诱导表达 GST—GRIM-19及其截断体融合蛋 白，用 GlutathioneSepharose4B纯化 ，纯化后蛋 白经 Western-blot鉴定 。结果 pGEX-4T一3一GRIM一19及其截断体原核表达 载体构建正确 ，并在大肠杆菌 中成功诱导表达 ，IPTG诱导以浓度0．5raM，时间2h为宜，且通过GlutathioneSepharose 4B成功纯化到融合蛋 白。结论 成功构建GRIM一19及其截断体原核表达载体 ，诱导表达并纯化 GST—GRIM-19及其 截断体融合蛋 白。 关键词 ：GRIM-19；诱导表达 ；纯化 中图分类号 ：R730．231 文献标识码 ：A ConstructionofGRIM一19 and ItsTruncatedbodyprokaryoticexpression vectorand fusion protein inducedexpression and purification WANGQing—yuan，ZHUJing，ZHOUYing，eta1．(MolecularlaboratoryDepartmentofObstetricsand Gynecology，AnhuiProvincialHospitalaffiliatedtoAnhuiMedicalUniversity，Hefei230001，China) Abstract：0bjective ToconstructtheGRIM19anditstruncatedbodyprokaryoticexpressionvector，expressthe Fusionprotein inE．coliandpurifytheexpressedproduct．M ethods GRIM一19ItsTruncatedbodygenesequencewith BamH I andXhoI，restrictionenzymecuttingsitewereamplifiedfrom totalRNA ofHeLacelllinebyreversetran— scription-polymerasechainreaction (RT—PCR)，thentheGRIM一19itstruncatedbodygenesequencewasinsertedinto theprokaryoticexpressionvectorpGEX一4T-3，inducedexpressthefusionproteininE． coliandpurifiedbyGlutathione Sepharose4B，Western—blotwereusedtotestthefusionprotein．Results ThepGEX-4T一3一GRIM一19itstruncatedbody prokaryoticexpressionvectorwasconstructedcorrectlyandthefusionproteinwascorrectly inductedexpression，the optimalconcentrationandtimeofIPTG forinductionwas0．5mM and2h，andthefusionproteinwassuccessfullypuri— fied．Conclusion ThepGEX一4T一3一GRIM一1