L-色氨酸印迹改性海藻酸钙凝胶微球的制备.docVIP

L-色氨酸印迹改性海藻酸钙凝胶微球的制备 2、实验部分 2.1 实验材料 海藻酸钠（SA，上海国药化学试剂厂）；醋酸乙烯酯（VAc，上海国药化学试剂厂），使用前应提纯；氯化钙（上海豪恩化学厂）；亚硫酸钠（浙江永嘉化学试剂厂）；过硫酸钾（KPS，上海恒新化学试剂厂），使用前应进行重结晶处理；氯化钠（湖北银光盐化化学试剂厂），色氨酸。 集热式恒温磁力搅拌器 DF-101S 郑州长城科工贸有限公司 电子天平 BS124S 北京塞多利斯仪器系统有限公司 医用超声波清洗器 KQ-100E 昆山市超声仪器有限公司 循环水式多用真空泵 SHB-III 郑州长城科工贸有限公司 高速离心机 TGL-16G 上海安亭科学仪器厂 移液枪 Proline 上海科华实验系统有限公司 荧光分光光度计 Cary Eclipse 美国Varian 医用超声波清洗器 KQ-100E 昆山市超声仪器有限公司 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9203A型 上海精宏实验设备有限公司 ℃鼓风干燥，得到干态小球待用。 空白微球的制备：除了不加入色氨酸，其它步骤同上。 2.3 浓度标准曲线的绘制分别配制2mmolL-1的L-色氨酸（L-trp）水溶液然后配制1~7μmol*L-1系列L-trp、L-yr标准溶液测定不同浓度L-trp和L-yr标准溶液的荧光强度，绘制荧光强度浓度标准曲线如图-1和3-2所示。 图3-1 L-trp标准曲线tryptophane L-trp标准曲线的回归方程为式，线性相关系数为0.9996。Int=7.49374×Conc+0.36238 式（1）℃的恒温振荡器中洗脱2次，每次12小时。待洗脱完毕后，将洗脱液换成水洗去洗脱液，将在溶度为2mmol/L的色氨酸溶液中做吸附实验。 将洗脱后的微球放入50mL锥形瓶中，加入20mL初始浓度为2mmolL-1的L-水溶液25℃中恒温振荡后，用移液枪移取μL上清液稀释至一定体积，用荧光分光光度计测得稀释后，并根据标准曲线计算溶液的浓度。根据测得的分别按式3-3）、式3-4）和式3-5）计算平衡吸附量Q（μmol*g-1）、静态分配系数KD（mL*g-1）、分离因子α和印迹因子β 式（3-3） 式中：Q——静态平衡吸附量μmol*g-1；C0——底物的起始浓度mmol*L-1； Ca——吸附平衡时底物的浓度mmol*L-1； V——底物溶液的体积mL；m——膜的质量g。 式（3-4） 式中：KD——静态分配系数mL*g-1； Cp——吸附平衡时底物在膜上的浓度μmol*g-1； Cs——吸附平衡时溶液中底物的浓度mmol*L-1。 KD体现了MIM对底物吸附能力的大小，KD越大表明对底物吸附能力越强。 式（3-5） 式中：β——印迹因子KdI——MIM对的静态分配系数mL*g-1； KdN——BM对的静态分配系数mL*g-1。β体现了MIM与在分子识别上的差异，β越大表明印迹效果越好。 溶胀度（%） 静态平衡吸附量Qe(umol/g) 静态分配系数Kd(mL/g) 印迹因子 296 314 9.36 11.43 5.67 7.12 1.26 238 288 9.46 15.87 5.78 9.95 1.72 196 246 10.42 33.14 6.72 21.98 3.27 231 328 9.73 25.92 6.34 16.9 2.67 268 376 7.1 18.27 4.52 11.19 2.47 309 587 7 10.03 4.43 6.35 1.41 用量对印迹微球吸附性能的影响 KPS=0.01 KPS=0.15 KPS=0.02 KPS=O.025 KPS=0.03 KPS=0.035 溶胀度（%） 静态平衡吸附量Qe(umol/g) 静态分配系数Kd(mL/g) 印迹因子 VAc=0.05 516 614 3.87 4.01 2.4 2.51 1.04 VAc=0.10 256 296 5.7 24.6 6.46 8.85 1.36 VAc=0.15 219 278 8.01 28.02 7.26 16.13 2.22 VAc=0.2 196 246 10.42 33.14 6.72 21.98 3.27 VAc=0.25 134 189 19.9 30.97 12.13 18.9 1.56 VAc=0.3 121 156 10.61 15.76 6