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珍稀观赏竹组织培养实验报告 食品科学与工程101 何诗瑾 201016020121 实验日期：3月10日—4月8日 实验一 培养液与培养基的配置 一 、 实验目的 学习母液法配制培养基以及掌握培养基灭菌的方法 二 、 实验原理 组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。 1.试剂 MSNH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,CaCl2·2H2O ,MgSO4·7H2O,FeSO4·7H2O Na2-EDTA,MnSO4·4H2O,ZnSO4·7H2O,CuSO4·5H2O,维他命，盐酸硫胺素，BA1培养液，去离子水。 2.仪器设备 电子天平，精密电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml、1000ml）量筒（1000ml、100ml、10ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，试剂瓶，玻璃棒，药芍，称量纸，转子等。 四、 实验步骤 1 母液的配制 先用量筒称量适当去离子水放入500ml烧杯中，用电子天平称取30g糖，放入烧杯中溶解，放入转子，不断搅拌，然后按照配方表中用10ml量筒依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 , KH2PO4 , MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O等，待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，依次按照顺序把微量元素母液分别加入到烧杯中，当最后一种化合物完全溶解后，先测量溶液PH，然后用标准1mol/LNAOH调节PH至5.7，搅拌,将溶液转移至1000ml量筒中，用蒸馏水润洗3-6次，再加蒸馏水至980ml,用精密电子天平称取琼脂2.5g,倒入1000ml容量瓶中，搅拌均匀，再将原先配制好的母液倒入，加去离子水定容至1000ml，用锡箔纸封口，并贴好标签，注明培养液名称，配置日期，配置人。放入高温杀菌箱杀菌15min。趁热将配好的培养液，分装到试管内。 五、试验结果分析及注意事项 配制母液时注意药品只能出不能进。注意焦头滴灌不可碰到量筒。配制培养基前先大致估计一下药品数量，不够时提前配制。 培养基灭菌时注意要放干净冷空气。分装培养基时要趁热，以免琼脂凝固。 实验二 无菌植株的建立 一 、 实验目的 通过实验，初步掌握外植体材料消毒及在超净工作台上接种的方法与注意事项 二 、 实验原理 植物细胞具有全能型，其外植体接种在无菌的人工培养基上，能长成完整的无菌植株。 三 、 实验材料、试剂和仪器设备 超净工作台、培养基，大号镊子，剪刀，酒精灯，喷雾器，烧杯，手术刀 四、 实验步骤 1．取材 去温室，取竹子的芽，每人5根 2．剪裁 将取来的芽完整的截取，放入烧杯中，取新烧杯，剪两块纱布，一块沾取洗洁精，擦洗烧杯，清洗完毕后，将剪好的植株放入烧杯中，用新纱布将烧杯口盖住，剪一个口子，将水管插入，用清水冲洗1小时。此间，穿好实验服去清理时去清洁手臂，洗手致手肘部位两遍。 3.准备 打开超净工作台，用酒精清洗桌面与器材，高温杀菌器材。将高温杀菌器预热。 4.灭菌 将洗净的植物放入次氯酸钠溶液里真空抽滤10分钟。将器材放入高温中杀菌。每组分配四个培养皿，一个放次氯酸钠，三个放去离子水，培养皿盖子用来切植株。将培养皿用去离子水清洗。 5.接种 将灭菌处理好的材料在超净工作台上，用镊子和刀片将竹子的芽剥出，放入配有培养基的试管中，试管开封须在酒精灯上加热，芽朝向外三分之一放入培养基内，密封。 6.接种完毕后，用记号笔写上制作人编号等相关信息。 7．清理 接种完毕后，将器具拿去清洗，用洗洁精洗一次，ROA水洗一次，去离子水洗一次，打扫实验室。 五、 试验结果分析及注意事项 注意事项： 做本次实验时在灭菌时注意要靠近超警工作台内侧，不可接触外部空气，进出超净工作台时都需要灭菌。 实验三 组培苗的移栽 一 、 实验目的 组织培养中培育出来的苗通常称为组培苗或试管苗。由于试管苗是在无菌、有营养供给、适宜光照和温度近100％的相对湿度环境条件下生长的，因此，在生理、形态等方面都与自然条件生长的正常小苗有着很大的差异。所以必须通过炼苗，例如通过控水、减肥、增光、降温等措施，使它们逐渐地适应外界环境，从而使生理、形态、组织上发生相应的变化，使之更适合于自然环境，只有这样才能保证试管苗顺利移栽成功。通过，要求学生学会和掌握组培苗的驯化和移栽方法及移栽后的管理。 1、材料：组培苗。 2、试剂与用具：蛭石、珍珠岩、腐殖土，草炭土、砂子、喷壶、育苗盘、塑料钵等 2．移栽前的练苗：移栽前可将培养物不开口移到自然光照下锻炼2-3d，让试管苗接受强光的照射，使其长得壮实起来，然后再开口练苗1-2d，经受较低湿度的处理，以适应将来自然湿度的条件。 3．移栽和幼苗的管理：从试管中取出发根的小苗，用自来水洗掉根