动物细胞融合和单克隆抗体3课件.pptVIP

植物体细胞杂交过程示意图 一、动物细胞融合 又称为细胞杂交。指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。 1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？ 5、为什么灭活的病毒能作为诱导剂？灭活的原理是什么？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 人们获得抗体的传统方法是什么? 动物特异性免疫 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活）。 第二次筛选：对已经选择性培养的杂交瘤细胞进行“克隆化培养”，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的即是所需要的杂交瘤细胞。 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 提取单克隆抗体。 1、作为诊断试剂： 具有准确、高效、简易、快速特点. 2、用于治疗疾病和运载药物： * * * * 2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 2002年12月30日， 两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在 “产房”—电融合仪内孕育新生命。 “太空婚礼” 这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术 植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术 (1) (1) (2) (3) (4) (5) 知识回顾 植物体细胞杂交过程 植物细胞 A（番茄） 植物细胞 B（马铃薯） 去除细胞壁 原生质体 A 原生质体 B 原生质体融合 正在融合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 脱分化 愈伤组织 杂种植株(番茄马铃薯) 再分化 （一）.动物细胞融合概念 不同DNA的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合 融合后的细胞（杂交细胞）进行有丝分裂 （动物细胞培养技术） （二）. 动物细胞融合过程 2、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？ 酶解法，纤维素酶和果胶酶。无需，因为动物细胞无细胞壁。 物理方法：离心、振动、电激；化学方法：聚乙二醇 能 ；还可以利用灭活的病毒进行诱导。如灭活的仙台病毒 3.融合后细胞的类型？ AB杂种细胞遗传物质有什么特点？ 三种AA、AB、BB（A、B） 含两种生物的遗传物质 病毒 灭活 丧失感染活性 保留融合活性 （二）.原理： 细胞膜的流动性。 （三）.促进细胞融合方法： 物理法：电激、振动、离心等 化学法：聚乙二醇（PEG） 生物法：灭活的病毒（最常用） 产生杂交细胞，即具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 （四）. 结果： （五）动物细胞融合技术的意义和应用 有何同？不同？ 动物细胞融合 植物的体细胞杂交 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 生物：灭活的病毒 物理（离心、振动、电激） 化学（聚乙二醇） 诱导融合方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合过程 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 细胞的全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 （七）植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较 动物体内 刺激 抗体 筛选单一浆细胞 不能无限增殖产生大量抗体 抗原 浆细胞 这种方法的缺点是什么? 产量低、纯度低，制备的抗体特异性差。 血清 二、单克隆抗体 每一个浆细胞只能产生一种特异性抗体 体内产生的特异性抗体多达百万种 如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 动物细胞融合技术 单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞 骨髓瘤细胞能无限增殖 + 一个浆细胞只分泌一种特异性抗体 设计方案： 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验 （一）.单克隆抗体的概念 由单个B淋巴细胞（浆细胞）经过克隆形成的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 （二）.单克隆抗体的制备过程 （二）.单克隆抗体的制备过程 ①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？ ② 会有几种融合方式？ ③ 杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？ ④ 是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？ ⑤ 如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？ BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） （一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活 获得产生相应抗体的B细胞 （二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞