临床免疫分析发展趋势和化学发光技术应用.ppt

将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、 抗-HBs连接为一体，形成双抗体夹心法 3 蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)3]2+－抗体－抗原－抗体－磁珠复合体吸入流动测量室，此时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的抗-HBs（与生物素结合的和与[Ru(bpy)3]2+结合的抗体）也被吸出测量室 4 蠕动泵加入含三丙胺（TPA）的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程 5 终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定 4、免疫荧光 4.1时间分辨免疫荧光（TRFIA) 美国 PerkinElmer 芬兰 Wallac 新波 达安基因 4.2光激化学发光（Lica） 博阳 4.3多种技术综合 美国雅培 AxSYM MEIA 日本东曹MEIA 【化学发光免疫分析种类】 基本原理 TRFIA是用镧系稀土元素螯合物标记抗体或抗原，检测标本中相应的抗原或抗体，用时间分辨荧光免疫分析检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分析。 时间分辨荧光免疫分析 TRFIA TRFIA 临床免疫分析发展趋势及化学发光技术应用 - 化学发光 - 荧光偏振 - 微粒子酶放大化学发光 电化学发光 - 时间分辨免疫荧光 抗体芯片 透射和散射比浊 流式细胞技术 - 免疫扩散 - 免疫沉淀/免疫凝集 - ELISA - IFA RIA ICT 免疫学和自动化技术在临床免疫学诊断领域中的应用将大大加速 标记免疫学分析技术发展历程 免疫荧光分析(Coons, 1941) 放射免疫分析(Berson和Yalow, 1960) 酶联免疫吸附分析 (Engvall, 1971) 金标免疫分析(Faulk和Taylor, 1971) 化学发光免疫分析(Arakawa， 1977) 时间分辨荧光免疫分析(Soini和Hemmila，1979) 电化学发光免疫分析(Leland, 1990) 放射免疫诊断技术（RIA） 酶联免疫诊断技术（ELISA） 化学发光免疫诊断技术（CLIA） 20世纪 60年代 70年代 80年代 90年代 2000年 2020年 时间 近代临床免疫诊断技术发展历程 临床免疫诊断技术的发展基本历经了以下三个阶段： 方法 中国 欧美 放射免疫法（RIA） 1.兴起于20世纪70年代，现仍普遍使用于县级以上医院； 2.产品处于衰退期； 3.厂商试剂与仪器共同开发，试剂基本系列化。 1.兴起于20世纪60年代，现已基本退出临床应用； 2.产品生命周期已终结； 3.厂商试剂和仪器共同开发，试剂基本系列化 酶联免疫法（ELISA） 1.兴起于20世纪80年代，现普遍使用于各级临床机构，为我国临床免疫诊断的基本方法；2.产品处于成熟期； 3.厂商试剂和仪器共同开发，试剂尚未系列化。 1.兴起于20世纪70年代，现仍在临床应用； 2.产品处于衰退期； 3.厂商试剂和仪器共同开发，试剂基本系列化。 化学发光免疫法（CLIA） 1.导入于20世纪90年代，逐步进入各大中医院； 2.产品处于快速成长期； 3.正逐步实现试剂和仪器共同开发，试剂逐步系列化 1.兴起于20世纪80年代，现已被临床普遍使用，成为临床免疫诊断的支柱方法； 2.产品处于成熟期； 3.厂商试剂与仪器共同开发，仪器自动化程度高，试剂系列化状态好。 近代临床免疫诊断技术发展历程 技术成熟度高 放射性（125 I）污染和危害 125 I 的半衰期短，试剂有效期短 标记物125 I 的稳定性差，批间、批内的变异较大 标准曲线有效期短，必须每次定标 操作繁琐，出报告时间长 无法保存备用。 放射免疫技术（RIA） Rosalyn Yalow, 1977 成本低廉 定性、半定量和定量均可以检测 O.D值在低中浓度范围与酶活性呈线性关系 可以肉眼简单判读或酶标仪准确判读结果 酶免疫分析技术 (EIA) 灵敏度高，检测低限达10-19mol 测定范围宽，可达9个数量级 自动化程度高，操作简单 试剂稳定性好，无污染有效期6－24月 化学发光免疫分析（CL