c57bl6j中老年鼠帕金森病模型的生物学标记物检测及其分析word格式论文.docxVIP

4 结论…………………………………………………………………………30参考文献………………………………………………………………………28 附录……………………………………………………………………………34 攻读学位期间发表的学术论文目录………………………………………… 42致谢…………………………………………………………………………… 43C57BL/6j 中老年小鼠帕金森病模型 生物学标记物检测及其研究中 文 摘 要目的：为了寻找帕金森病（parkinson disease,PD）临床早期的诊断 指标，建立帕金森病临床前期中老年小鼠模型。检测小鼠的行为学、血生 化、病理形态学、影像学以及超微结构病理学的改变。寻找符合帕金森氏 病（PD）病理改变，具有较高诊断效率的生物标记物。方法：72 周健康 C57BL/6j 中老年雄性小鼠 30 只，体重 30g，分为模型 组和对照组。空白对照组：5 只腹腔注射等量生理盐水。模型组：腹腔注射 1-甲基-4 苯基-1,2,3,6-四氢吡啶，1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tet-rahydrophridine，MPTP,20mg/kg；模型组随机 分为五组，每组 5 只。每周给药 2 次，给药时间为 1 周，2 周，3 周，4 周， 5 周。模型组在注射药物后一周通过行为学进行检测。每组停药后第 1 周取 小鼠血液并经心灌注制作小鼠脑部标本。提取小鼠血浆，采用高效液相色 谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）检测血生化指标：8-羟基脱氧鸟嘌呤（8-OHdG）和尿酸（UA）的变化数值。形态学主要采用 通过酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）免疫组织化学方法观察小鼠 多巴胺神经元，根据酪氨酸羟化酶阳性细胞计（Count of positive cell，CPC） 判断多巴胺神经元丢失情况。透射电镜下，观察小鼠中脑纹状体以及黑质 内超微结构的病理改变。影像学中 3.0T 核磁共振检测观察小鼠大脑面积， 纹状体面积，黑质长度变化。结果：空白对照组与模型组相对比：（1）行为学检测小鼠肢体运动协 调能力，空白对照组未发现小鼠行为学异常，模型组第 3 周观察发现中老年小鼠的肢体运动协调能力下降，行为学检测统计结果显示模型组从第 3周开始与空白对照组有差异性（P0.05）。（2）血液生化指标检测，模型 组的 8-OHdG 与 UA 的测量数值随着给药次数增加发生了变化，模型组第 3 周开始与对照组 8-OhdG 数值有增高，模型组第 3 周与空白对照组 UA 数值 有降低，模型组与对照组有差异性（P0.05）。（3）病理形态学检测，免 疫组化 TH，空白对照组小鼠黑质致密带（SNC）区域的 TH 阳性神经元成 带状分布，数量正常；模型组 TH 阳性神经元细胞分布不规则，数量减少。 模型组第 3 周 TH 阳性神经元数量与空白对照组 TH 阳性神经元数量存在差 异（P0.05）。（4）小鼠中脑黑质超微病理改变：对照组小鼠黑质神经元 细胞的细胞器，内质网，线粒体以及高尔基体结构正常；模型组给药后第 3 周小鼠黑质神经元细胞粗面内质网扩张，数量明显减少，细胞收缩，质膜 泡形成，线粒体肿胀，细胞空泡化及坏死脱落，随着给药剂量，次数的增 加神经元变性加重。（5）影像学改变，空白对照组小鼠大脑面积，纹状体 面积，黑质长度都正常；模型组随着给药次数，数量的增多，模型组给药 后第 3 周开始出现大脑面积，纹状体面积明显减小，黑质的长度缩短。结论：动物行为学，血液生物化学，超微病理学，形态学，影像学都 在模型组给药后第 3 周开始出现原发性帕金森的症状。关键词：原发性帕金森病；生物学标记物；临床前期动物模型；行为学试验；影像学诊断；超微结构病理学C57bl/6jsenilemicemodel Parkinsons diseaseBiological marker detection and researchABSTRACTObjective : In search of Parkinsons disease (Parkinson diseases, PD), establish senile mice model preclinical of Parkinsons disease。Detection of mice ethology, blood biochemistry and pathological morphology, imaging, andultrastructural pathological changes。In Parkinson’s disease to look for theappr