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鼠尾胶原蛋白 无尘车间内生产，保证洁净度 可用于包被细胞培养器皿(单分子层包被) 也可形成具有一定强度的三维胶用于细胞的三维空间培养 通过细胞培养测试(包括三维胶内的细胞培养) 电泳结果和 Sigma 的同类产品无显著区别。 产品为无菌的溶液，省去从干粉配制的麻烦。 包装规格 产品号 包装规格 200110-10 10mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 无菌。 200110-50 50mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 无菌。 产品说明 杭州生友生物技术有限公司生产的鼠尾胶原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I)是通过 Birkedal-Hansen1 的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。 生友鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。 生友鼠尾胶原蛋白包被的培养皿中生长的 PC-12 细胞 生友鼠尾胶原蛋白三维胶中生长的 NIH-3T3 细胞（接种后 5天） 和Sigma鼠尾胶原蛋白(cat# C7661)SDS电泳对比。A: Sigma B：生友 使用方法 1、细胞培养器皿的表面包被 推荐浓度： 1-5ug/cm2 以包被浓度为 2 ug/cm2 为例： 用无菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/ml。按表 (一)体积加到相应的培养器皿中： 表面积(cm2 ,每孔或每皿) 加入 0.012mg/ml 胶原的体积 ( ul ) 96孔细胞培养板 0.3 50 24孔细胞培养板 1.9 300 12孔细胞培养板 3.8 600 6孔细胞培养板 9.5 1580 35mm细胞培养皿 8 1330 60mm细胞培养皿 21 3500 100mm细胞培养皿 55 9170 确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1小时后，用PBS洗3-4次后直接使用。 包被好的器皿在 4-25至少可保存3个月以上的时间。 2、三维胶原的制备 生友鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。生友胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06X 体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。 需要的溶液 ( 均需要 无菌 、 预冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚红用于 pH 指示 )或 10x 培养液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 双蒸水 A．不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul生友鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100ul 10xPBS或10x培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10xPBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。 B．含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200ul生友鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23ul 10xPBS或10x培养液，混匀(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。 注：鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。 1 、 Birkedal-Hansen, H. 1987. Catabolism and turnover of collagens: Collagenases. Methods Enzymol. 144 : 140-171.