鬼臼毒素衍生物lg-2对人肝癌细胞系hepg-2凋亡的诱导作用word格式论文.docxVIP

Key wordspodophyllotoxin； Cell cycle；Apoptosis；HepG-2缩略语表缩略词英文全称中文全称FCMFlow Cytometry流式细胞术WHOWorld Health Organization世界卫生组织TNMTumor Node Metastasis肿瘤分期系统DEPCDiethyl pyoearbonat焦碳酸乙二醋DMSODimethyl sulfoxid二甲基亚砜FBSFetal bovine serum胎牛血清qRT-PCRReal-timequantitativepolymerase chain reaction实时荧光定量 PCR引言肝脏肿瘤有恶性和良性两种，恶性肿瘤最常见的为肝癌，而恶性肿瘤又分为 原发性和继发性（即转移性）两种。前者以上皮性肿瘤最多见，而后者以肝细胞 癌最常见。临床上继发性肝癌较原发性肝癌常见，西方国家尤其如此。原发性肝 癌是我国常见的的恶性肿瘤，目前占我国恶性肿瘤死亡原因的第二位，男性比女 性多见。其病因和发病机制尚不明确，根据临床观察和实验研究，可能与以下因 素有关：1.病毒性肝炎 乙肝、丙肝病毒的慢性感染是肝癌细胞癌发生最重要的 危险因素。肝癌的高发区也是乙肝感染的高发区。但慢性肝炎如何发展成肝细胞 癌的机制目前尚未完全阐明。2.肝硬化 原发性肝癌合并肝硬化的发生率比较高， 尤以肝细胞癌合并肝硬化的发生率最高。其中大结节型肝硬化有较高的肝癌发生 的危险。3.黄曲霉 黄曲霉菌产生的黄曲霉素 B1 被认为是人类致癌剂。用其喂食 实验动物可以诱发肝癌。但迄今为止，尚未看到这种毒素直接引起人类发生肝癌 的证据。4.其他危险因素 如亚硝酸盐、营养、饮酒、寄生虫及遗传因素。这些 致癌因素与人类原发性肝癌的确切关系尚未确定，有待今后进一步研究。原发性 肝癌根据大体病例形态可分为巨快型、结节型和弥漫型;根据生长方式可分为浸 润型、膨胀型、浸润膨胀混合型和弥漫型；根据组织学类型可分为肝细胞癌、胆 管细胞癌、混合型癌。其中肝细胞癌最多见，占原发性肝癌的 90%以上。如今对于原发性肝癌的治疗有手术治疗和非手术治疗两种,目前的治疗原则 是以手术切除为主的综合性治疗。但手术治疗需要有切除的条件和适应症。手术 后若复发又该如何呢？众所周知，肝是人体内体积最大的肝实质性脏器，其自我 修复功能也非常强大，也就是说肝细胞的再生能力很强。这是把双刃剑，也就是 这个原因，肝癌的生长速度和转移也都发生的较早。那么国内外的研究者就在考 虑是否可以从肝细胞及肝癌细胞入手将其杀灭。各种细胞都会凋亡，肿瘤细胞也 是如此。如果可以用药物诱导其凋亡，那么就可以开辟治疗肿瘤的新途径。这类 诱导药物已问世不少种类，但其毒副作用也一直困扰着研究者和临床医务人员。 因此寻找疗效好但毒副作用小的此类药物就成为了当今这个领域的一个研究热 点。鬼臼毒素又名鬼臼毒、鬼臼素、鬼臼脂素，是从鬼臼类植物中分离得到的天 然抗肿瘤活性成分。主要来源于小檗科的鬼臼属、八角莲属和山荷叶属等，它具有显著的细胞毒性和抗肿瘤作用，目前临床上应用较为广泛的依托泊苷（VP-16)和替尼泊苷(VM-26)均为半合成鬼臼毒素衍生物[1]，它们对小细胞肺癌、睾丸癌、 急性白血病以及恶性淋巴肿瘤等均有良好的疗效[2]。现有的鬼臼毒素对于晚期的 肿瘤患者来说已产生了普遍的耐药性，并且其水溶性差、抗肿瘤谱窄、严重的骨 髓抑制的缺点也限制了其使用。为克服 VP-16 和 VM -26 的不良反应，人们对其进行了大量结构修饰工作 [3-4]。N-(1-烃氧基-2,2,6,6-四甲基-4-哌啶基氧羰基)-L 丙氨酸-4’-去甲-4-脱氧鬼臼 酯（Lg-2）为本课题组新合成的一种鬼臼毒素衍生物，是以丙氨酸作为 Linker 连接氮氧自由基生成一个新型的去甲表鬼臼酯化合物。（图 1）前期研究表明， Lg-2 有较好的抗肿瘤活性。由于现有的鬼臼类衍生物对肝癌的抗肿瘤活性较差， 本研究以肝癌 HepG-2 为研究对象，研究 Lg-2 对 HepG-2 的抗肿瘤效果，并对其 作用机制进行了初步探讨。一．材料与方法1.1材料HepG-2 细胞兰州军区总医院Lg-2兰州大学化学化工学院1.1.1主要试剂RPMI1640 培养基美国 Sigma 公司胎牛血清杭州四季青公司胰蛋白酶美国 Sigma 公司噻唑蓝（MTT）美国 Sigma 公司二甲基亚砜（DMSO）美国 Sigma 公司Trizol大连 Takara 公司 逆转录试剂盒大连 Takara 公司qRT-PCR 试剂盒大连 Takara 公司1.1.2主要试剂的配制1）0.1 mol/L PBS 缓冲液：称取 Nacl 8g、Kcl 0.2g、NA2HPO4.12H2O 3.49g、KH2PO40.2g，加入