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第一节 基因工程的概述 又叫基因拼接技术或DNA重组技术。指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞，并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。 一、 什么是基因工程 获得人类所需的基因产物 结 果 剪切、拼接、导入、表达 基本过程 DNA分子水平 操作水平 基 因 操作对象 生物体外 操作环境 基因拼接技术、DNA重组技术等 别 名 二、转基因操作的工具 问题探讨： 　　　苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　　让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 想一想需要做哪些关键工作？ 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 普通棉花　　抗虫棉 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与棉花DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体 （一）限制酶——“分子手术刀” ⒈主要来源： 2.作用特点： 3.作用结果： 识别特定核苷酸序列，具有特异性。 原核生物 产生黏性末端或平末端 ,切断磷酸二酯键 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子(记忆 EcoRⅠ的作用特点。） 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 Go back 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 Go back 重复演示 Bam HⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG HindⅡ GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平端切口 粘端切口 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? （二）“分子缝合针” —— DNA连接酶 ①作用: 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA. ②作用原理： 催化磷酸二酯键形成 ③种类：E·coli DNA连接酶或T4DNA连接酶 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 　 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 ③类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 种类 作用底物 作用部位 作用特点 形成产物 限制酶 DNA分子 磷酸二酯键 专一性识别特定的核苷酸序列，使特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂 粘性末端或平末端 DNA连接酶 DNA片段 磷酸二酯键 恢复被限制酶切开的两的核苷酸之间的磷酸二酯键 重组DNA分子 DNA聚合酶 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 将单个的脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上 子代DNA DNA解旋酶 DNA分子 碱基对见的氢键 将DNA两条链之间的氢键打开 形成脱氧核苷酸单链 DNA（水解）酶 DNA分子 磷酸二酯键 脱氧核苷酸链水解成单个脱氧核苷酸 游离的脱氧核苷酸 质粒 质粒：裸露、结构简单，具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 （三）载体（运载工具） 1、种类： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动、植物病毒。 插入基因 终止子 标记基因 复制原点 启动子 RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因转录出mRNA。 鉴别受体细胞是否含有目的基因。 转录停止的位置。 大肠杆菌质粒载体的基本结构示意图 1、有一个（多个）限制酶切割位点，供外源DNA片段插入其中。 2、能自我复制。 3、有特殊的遗传标记基因。 2.运载体的特点 1、科学家们经过多年努力，创立了一种新兴生物技术——基因工程，实施该工程的最终目的是[ ] A 定向提取生物体DNA分子 B 定向地对DNA分子进行“剪切” C 定向改造生物的遗传性状 D 在生物体外对DNA分子进行改造 C 练习巩固 2、下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体[ ] A 细菌质粒 B 噬菌体 C 动植物病