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变性梯度凝胶电泳实验原理DNA 双链分子在全长不断增加温度或用化学变性剂条件处理下，两条链就会开始分开（即解链）。首先解链的区域由解链温度较低的碱基组成。GC碱基对比AT碱基对结合得要牢固，因此GC含量高的区域具有较高的解链温度。同时影响解链温度的因素还有相邻碱基间的吸引力。解链温度低的区域，通常位于端部称作低温解链区。如果端部分开，那么双螺旋就由未解链部分束在一起，这一区域便称作高温解链 (图1) 。图1如果温度或变性剂浓度继续升高，两条链就会完全分开。变性梯度凝胶电泳法依据首要的一点是：DNA双链末端一旦解链，其在凝胶中的电泳速度将会极剧下降。第二个根据是，如果某一区域首先解链，而与其仅有一个碱基之差的另一条链就会有不同的解链温度，其电泳速度也会有明显差别。因此，将样品加入含有变性剂梯度的凝胶进行电泳就可将二者分开（图 2, 1 和 2 道）。图2最终，如果一双链在其低温解链区碱基错配（异源双链），而与另一等同的双链相比差别仅在于此，那么，含有错配碱基的双链将在低得多的变性剂浓度下解链。事实上，样品通常含有突变、正常的同源双链以及配对的异源双链，后者是在PCR扩增加时产行的。而含有错配的双链（图2中的3和4道）通常可以远远地与两个同源双链（图2中1和2道）分开，这种分离效果使该方法灵敏度很高。为使仅有一个碱基之差的不同分子取得最好的分离效果，必须先选择所要研究的DNA范围以及电