第七章工业染菌.pptVIP

主要内容 【本章学习的目的和要求】 1．掌握工业上常见的污染菌种类 2．掌握染菌检查的方法、防治措施 3．了解发酵染菌的危害 4．了解发酵染菌的分析 主要内容 第一节 工业发酵染菌的危害 一、概述 二、不同染菌时间对发酵的影响 1、种子培养期染菌 2、发酵前期染菌 3、发酵中期染菌 4、发酵后期染菌 2、杂菌检查 ①显微镜检查： ②平板划线检查： ③肉汤培养检查 3、检查的工序和时间 二、染菌的分析 1、发酵染菌率 (1)总染菌率：指一年内发酵染菌的批次与总投料批次数之比乘以100得到的百分率。 (2)设备染菌率：统计发酵罐或其他设备的染菌率，有利于查找因设备缺陷而造成的染菌原因。 (3)不同品种发酵的染菌率：统计不同品种发酵的染菌率，有助于查找不同品种发酵染菌的原因。 (4)不同发酵阶段的染菌率：将整个发酵周期分成前期、中期和后期三个阶段，分别统计其染菌率。有助于查找染菌的原因。 (5)季节染菌率：统计不同季节的染菌率，可以采取相应的措施制服染菌。 (6)操作染菌率：统计操作工的染菌率，一方面可以分析染菌原因，另一方面可以考核操作工的灭菌操作技术水平。 2、染菌原因的分析 （1）种子带菌 （2）发酵设备及管件渗漏，管道网络配置不合理 主要包括三个方面：①发酵罐渗漏；②管件渗漏；③管道网路配置不合理。 （3）存在设备死角 ①法兰连接形成死角（见图7-1） ②罐底渣滓积累形成死角（见图7-2） ③石炭酸，5％浓度喷雾后，能使蛋白变性沉淀。石炭酸（苯酚）50毫升，加水950毫升配成。用于工作服、实验桌的灭菌。杀菌效果同升汞。 ④高锰酸钾：氧化剂。0.1％浓度能使蛋白质与氨基酸氧化，失去酶的活性，用于消毒，能抑制或杀死杂菌。 ⑤乙醇：又称酒精。消毒以75％浓度的效果最好。它能使蛋白质脱水变性。高浓度酒精会使蛋白质很快脱水凝固，消毒作用反而减弱。 使用仙台病毒诱导细胞融合步骤 1、先将亲本细胞分别制成悬液、混合离心。 2、将沉积细胞悬于1ml灭活的仙台病毒悬液，置冰浴间歇摇动20分钟，细胞凝集。 3、温度升至37℃ ，间歇摇动30分钟，使其进行融合。 4、洗去病毒，即可将融合物悬浮于选择性培养基进行培养。 (1)70％(或75％)酒精：超净台里常备70％酒精 棉球(卫生级酒精)，用于手和一些金属器械 或工作台面的消毒。 (2)0.1％新洁尔灭：主要用于手和前臂的清洗以 及工作后超净台面的清洁。超净台旁应常备 盛有0.1％新洁尔灭溶液的容器及纱布。 (3)来苏儿水(煤酚皂溶液)：主要用于无菌室桌 椅、墙壁、地面的消毒和清洗，以及空气喷 撒消毒，特别是污染细胞的消毒处理。 3、pH： 细胞培养的pH最适为7.2一7.4间，当pH低于6.0 或高于7.6时，细胞的生长会受到影响，甚至导致死亡。但是，多数类型的细胞对偏酸性的耐受性较强，而在偏碱性的情况下则会很快死亡。 3、空气： 细胞的生长代谢自然离不开气体，容器空间中的O2及CO2足以保证细胞体内的代谢活动的进行，但作为代谢产物的CO2在培养环境中还有另外一个重要作用，即调节pH的作用。 4、渗透压： 在保证细胞渗透压的情况下，培养液里的成分要满足细胞进行糖代谢、脂代谢、蛋白质代谢及核酸代谢所需要的各种组成，如包括十几种必需氨基酸及其它多种非必需氨基酸、维生素、碳水化合物及无机盐类等。 5、水质： （二）设备和仪器 1．无菌实验室 2．净化台 3．培养箱和CO2培养箱 4．倒置显微镜 5．液氮罐 6．器材 7．灭菌、消毒器具 （三）培养基选择与配制  细胞在体外的生存环境是人工模拟的，除需无菌、温度、空气、pH等条件以外，最主要的是培养基，它是供给细胞营养和保正细胞生长的物质，也是细胞的生存环境。 培养基必须具有下述基本条件： (1)营养物质： 培养基必须供给活细胞所需要的全部盐类。 (2)缓冲能力： 培养基必须含有非毒性的缓冲液，而且pH值在pH 7.0—7.2之间。 (3)等渗性： 溶解于培养基的物质浓度产生的等渗性必须与细胞内的液体一致。 (4)无菌： 培养基不能有微生物，利用培养基繁殖起来的微生物会破坏培养的活细胞。 培养基的分类 分类依据 种 类 固体培养基 状态 半固体培养基