化合物生物矿化逆同位素标记简析法.pptxVIP

化合物生物矿化的逆同位素标记分析法; 评估有机化合物的生物降解是地质与环境科学中的一个常见问题。直接测定有机物降解消耗的方法显然是不够精确的，因此常采用同位素标记的方法。有机物矿化的研究中，通常是用13C标记底物，由直接测定矿化产生的13CO2，以确定有机物的降解过程和程度，然而一般讲有机物标记困难且成本昂贵，沉积物等介质中的溶解有机物则根本无法标记，为此这里提出一种化合物矿化的逆同位素标记分析法。; 1.基本原理 化合物矿化的逆同位素标记分析法的原理是，在分析介质中加入13C-H2CO3标记的溶解的无机碳库（DIC=CO2（aq）+HCO3-+CO32-），则在封闭的培养系统中，有机物降解的终端产物CO2将在气相和液相分配，并稀释标记溶解无机碳库的13C丰度，基于同位素稀释质量平衡原理可以求得矿化所产生的CO2，进而得出有机物矿化过程，这是一种灵敏的、简单的和相对廉价的测定有机物矿化的方法。;图. 化合物生物矿化的逆同位素标记分析法;图.连续流气体测定Gasbench-IRMS系统; 2.一般流程 ; 过程举例 1）培养实验 于250ml血清瓶盛装135ml无碳酸盐缓冲的新鲜培养基，上盖并用CO2/N2（20/80，v/v）冲洗，然后将NaH13CO3和NaH12CO3 灭菌原液（各1M）由瓶口丁基橡胶塞注入，调节使介质的碳酸盐浓度为30mM，13C的比率为10%-50%，然后注入底物，并接种母体培养基，于300C黑暗中培养。 ; 2）样品制备 对于GC-IRMS测量，从培养瓶中取出0.5ml的液体样品，立即注入15ml预先盛有4.5ml无水H3PO4（1M）的血清瓶，用丁基橡胶塞密封，氦气或氮气冲刷玻管顶空，加热板加热使利用酸化反应转化DIC成为CO2，在CO2（g）-CO2（aq））平衡后，取部分顶空气体进行测定。DIC的浓度通过测定质量44的峰有标准校正得到，?13CDIC由以下计量关系式进行计量。 ;图.酸化样品产生的CO2，用吸附除去CO2的高纯氦气清扫，出口针连接到铜管的开口端侵入水中，以防止大气中CO2倒流进入样品。; 3）测试系统 ThermoFinnigan(不莱梅港市，德国,Thermo Fisher Scientific)GasBench Ⅱ ，配置着CTC自动进样器（CTC Analytics AG,Zwingen,Switzerland），和ConFloⅣ接口和一个DeltaⅤ质谱仪（也是Thermo Fisher Scientific）在ETH苏黎世（苏黎世，瑞士）。; 3.计量关系 1）?13CDIC测量计量公式 经H3PO4酸化的溶解无机碳DIC转化成CO2（g）和CO2（aq），由于CO2在气液两相中分配，因此需将直接测量对象CO2（g）的?13C，转变成DIC的?13C ，即?13CDIC。相关计量公式推导如下： （1） 式中，Xg和（1-Xg）分别为 CO2（g）和CO2（aq）的摩尔分数。 ; CO2（g）和CO2（aq）之间的同位素分馏系数定义为 （2） 由亨利定律CO2（aq）=?PCO2（g），有 （3） ; 合并以上各式，最后有 （4） ?; 式中，?是对CO2的亨利方程常数，在绝对温度T=298.15K的纯水系统为3.345×10-4mol.m-3.pa-1 ，?13Cg-aq为1.07‰，在其它情况下?依赖于溶液中盐的强度。由上式可见，修正关系还与Vg/Vl的比值以及绝对温度T有关，通常因为缺少?和?13Cg-aq 的数据，以上关系常用溶解无机碳标准溶液进行校正，只要保证样品与标准的Vg/Vl 比值、盐的强度和温度相同，则（1+Vg/（VlRT?））为常数，同时校正过程也包括了对测定过程可能同位素分馏的