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通过筛选抑菌圈发现新型抗生素 为了满足针对耐药性微生物治疗不断增长的需 产生抑菌圈克隆的识别 求，开发出了基于竞争的自适应进化筛选方法。 Streptomyces clavuligerus可以产生超过20种 优势 这种方法存在的一个难题就是如何从一个多样性 具有生物活性的次级代谢产物。包括许多B-内 的微生物克隆库中找到高价值的菌株，筛选到适 • 适用于各种适应性进化 酰胺类抗生素，如cephamycin C、cephalosporin 合下游药物开发，能够产生新型抗生素的最好候 方面的应用 C、clavulanic acid等。这里使用Streptomyces 选菌株。 clavuligerus(ATCC 27064)作为模式生物，演 示针对E.coli (Migula, Castellani and Chalmers • 加快新型耐药菌株感染 对于从克隆库中筛选抗生素产生菌株来说，通常 ATCC 47076)的抑菌圈的识别和挑取。两个菌 治疗方法的开发速度 使用琼脂平板抑菌圈或透明圈筛选法。具有抗性 株都从ATCC获得，使用TSB培养基进行培养。 的克隆可以产生并分泌对平板微生物具有抑制作 液体培养阶段使用摇床培养1-3天，相应的S. • 用户自定义软件参数， 用的代谢产物，因此在克隆周围产生了透明圈， clavuligerus在30℃，E.coli在37℃培养。S. 发现独特的生物学特性 根据透明圈的大小可以准确地从克隆库中筛选出 clavuligerus经过培养后，稀释培养液OD600 这些菌株。透明圈的直径和抗性代谢产物产量一 值在0.10-0.13之间，取2ul培养液点到TSA琼 • 通过可靠的自动化解决 般成正比例关系。因此，高价值的菌株通常产生 脂板上，28℃培养3-5天。S.clavuligerus在 方案筛选高价值克隆 直径最大的透明圈。这些克隆被筛选出来用于进 TSA平板生长后，经过稀释的E.coli培养液被均 一步的特性研究和药物开发。 匀地涂布到平板上，确保E.coli完全环绕并接触 到每个S.clavuligerus克隆。平板28℃继续培养 如果使用人工筛选并挑取产生抑菌圈的克隆，整 1 - 2 天 ， 并 每 天 观 察 。 如 图 1 所 示 ， 个过程不但慢、烦琐，而且易出错。为了解决这 S.clavuligerus克隆产生针对E.coli的抑菌圈。 些问题，Molecular Devices开发出了QPix400 系列微生物克隆筛选系统，提供了高通量自动化 克隆筛选和挑取平台，具有无与伦比的性能和效 率。这里我们详细描述了如何使用这个系统以及 软件模块客观筛选并挑取高价值的透明圈产生菌 株。