植物蛋白酶(生姜蛋白酶)的提取纯化工艺.docVIP

生姜蛋白酶的提取纯化工艺 一、实验目的 1、掌握生姜蛋白酶提取纯化工艺的基本原理和操作步骤 2、掌握生物工程下游加工技术的一些方法和技能 二、实验原理 生姜蛋白酶是从生姜中提取的有蛋白水解活性的酶，可用于肉类嫩化、酒类澄清等。其提取分离技术有超滤法、盐析法、有机溶剂法、絮凝法、亲和层析法等。然而， 生姜蛋白酶属大分子物质，超滤过程中易在膜表面聚积而产生浓差极化现象，且生姜蛋白酶在有机溶剂中易变性以及存在有机溶剂残留等问题，盐析法提取的生姜蛋白酶活性较低，与应用要求相差甚远；絮凝法提取专一性不强,制得的生姜蛋白酶纯度不高；亲和层析法提取的酶纯度虽然较高，但是操作复杂，不易工业化生产。相对来说，双水相萃取法能有效分离提取高纯度生姜蛋白酶。原因是双水相萃取具有两相界面而张力低，有助于保持生物活性和强化相际间的质量传递，易于连续化操作，具有目标产物收率高, 不存在有机溶剂残留，分离过程经济等特点。 双水相萃取技术是利用一种高分子聚合物和无机盐的混合溶液或两种水溶性不同的聚合物，在一定浓度下将体系分成互不相溶的两相，由于表面性质、电荷间及各种作用力（如憎水键、氢键和离子键）等因素的影响，使得目标蛋白酶和其他蛋白质在两相间的分配系数不同，从而达到分离目的。通过调整双水相系统中一系列参数就可选择性地萃取目标蛋白酶。本实验对成相物质组成、浓度和萃取条件进行了初步探索，建立了操作条件温和、能耗