考研科目,动物生物化学 第17章 核酸技术培训课件方案研究.ppt

第17章 核酸技术 ;生长激素基因注入小鼠受精卵中培育出了“硕鼠”;（1）重要的工具酶 （2） 载体 （3）DNA重组的过程;（1）重要的工具酶; 粘性末端：识别序列对称轴，左右两边切开， 形成凸出部分。 如 EcoR I: 5’ ---GAATTC CTTAAG---3’ ;5’ －G G C C－ 3’ 3’ －C C G G －5’;② DNA连接酶; ③ 碱性磷酸酶 催化DNA和RNA5′－磷酸基团水解， 产生5′－羟基末端，减少载体自身的环化。; （3）DNA重组的过程;目的基因克隆的基本过程;① 目的基因的制备;② 载体的选择和制备;③ 目的基因与载体 的酶切与连接;④ 重组DNA导入宿主细胞; （1）转化：将质粒或重组质粒导入宿主细胞的过程。 （2）转导：通过噬菌体或病毒的感柒作用将外援基因导入细菌的过程。 （3）转染：噬菌体、病毒为载体构建的重组体导入宿主细胞的过程。;⑤ 目的基因的筛选和鉴定;遗传学方法（表型）;分子杂交技术;Southern-blot 印迹杂交原理示意图 ; 菌落原位杂交;③ 聚合酶连锁反应（ PCR, DNA polymerase chain reaction ）;DNA核苷酸序列分析 ;④ 酶切鉴定;目的基因表达; 3 DNA技术的应用; (1) DNA指纹技术( DNA fingerprint ); ① 限制性片段长度多态性  （restriction fragment length  polymorphism，RFLP）; 用一种限制性内切酶去切DNA时，DNA 分子会降解成许多长短不等的片段，个体间 这些片段是特异的，可以作为某一DNA的标 记，将这种方法称为限制性片段长度多态性。; 在人体DNA文库中发现的由9–70bp重复 单位串联重复排列而成的高变异区，称为小卫 星DNA（minisatellite DNA）。 所有真核生物基因组中还存在由2-6bp为 重复单位的重复顺序，因其重复单位比小卫星 短，称为微卫星DNA（microsatellite DNA）。; 不同个体的多态性来源于重复单位的重 复次数不同。 同一家族小卫星重复单位含有相同或相 似的核心序列，用某一小卫星DNA作探针， 可与同一或不同物种多酶切DNA片段杂交， 获得高度个体特异性图谱称DNA指纹图谱。;  人的DNA 指纹图谱;DNA指纹图谱的特点： ① 一??能够检测十几个、甚至几十个位 点的变异性，有效的反应组织的特异性。 ② 具有很高的变异性。 ③ DNA指纹图谱谱带从亲代遗传给子 代，儿女的指纹图谱中几乎每一条的图谱中 找到。 ④ DNA指纹图谱具有体细胞稳定性，从 同一个体不同组织。;③ 随机扩增多态性DNA（Randomly Amplified polymorphic DNA，RAPD）; (2)转基因动物与动物克隆; 1982 年，人们将大白鼠的生长激素 基因放在质粒中小白鼠金属巯基蛋白启动 子之后 。 将重组好的这种质粒，用特制的微量 注射器注入小鼠受精卵的雄性原细胞核中， 再将这个受精卵植入小鼠子宫中。;; 结果为发育成熟的小鼠体重比对照小 鼠大两倍，成为“硕鼠”或“超级鼠”。; 1986 年，美国制备出转生长激素基因的猪。这种猪生长快，饲料转换率和瘦肉率显著提高而肥膘低。 我国现制备出转基因猪、羊、兔等。 然而，转生长激素基因的猪生殖能力明显下降，不能繁殖扩群。; 1996年7月世界 第一例从成年 动物体细胞，克 隆出的哺乳动物 绵羊“多利”诞 生。 ;;;1998年克隆批量化　　;美国俄勒冈州沃尔小组成功克隆两只恒河猴。; 克隆猪 同年，帮助培育出多利羊的生 物技术公司克隆出5只小猪仔，并宣称克隆猪 终将成为人类移植器官的“加工厂”，生产器 官包括角膜、皮肤、肾、肝 、肺、心脏等。 珍稀濒危动物的繁殖 克隆大熊猫的实 验已开始报道。; 2001年至今关于克隆人; 2004年8月11日英国颁发