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卵巢组织冷冻和移植研究进展 【关键词】 移植 ［摘要］ 卵巢是女性重要的生殖和内分泌器官，卵巢组织冷冻和移植将取代激素替代疗法成为恢复女性患者生殖功能和内分泌功能的重要方法。随着卵巢组织冷冻和移植相关技术的深入研究，其在生殖领域应用前景广阔。 ［关键词］ 卵巢；冷冻；移植；生殖 Research progress of ovarian tissue cryopreserved and transplantation WEI Lina，LI Zhixue，DING Jiatong.College of Animal Science and Technology，Yangzhou University，Yangzhou 225009，China ［Abstract］ Ovary is an important organ for the reproduction and endocrine of female.Ovarian tissue freezing and transplanting which will take the place of the hormone replacement therapy are important for restoring the functions of feminine reproduction and the endocrine.As the current reasearchs in correlative technology of ovarian tissue freezing and transplanting，it will have a better future. ［Key words］ ovary；cryopreserved；transplantation；reproduction 卵巢移植的历史最早可追溯到18世纪，在1932年Aldous Huxley［1］就预言冷冻的卵巢组织移植在人类的试管生殖中的应用，该技术就是现在所说的体外受精和克隆（Huxley，1932）。1950年，Kim SS等［2］开始用冷冻保存的性腺组织进行移植，但由于移植效果不理想，使得这一技术被长期搁置。直到1990年，随着对性腺组织保存技术临床应用潜力认识的提高及动物科学知识的发展，才又重新激发了人们对于卵巢移植的兴趣。本文将着重讨论卵巢冷冻和移植技术的发展及其在生殖领域的应用。 1 卵巢组织的冷冻保存 1.1 卵巢组织冷冻保存的可行性 自20世纪60年代末，就已经开始进行动物卵巢的低温冻存研究。Parrot等（1960）［3］用甘油作保护剂在-79 ℃冷冻保存小鼠的卵巢获得成功。近年来，卵巢冷冻技术迅速发展，在羊、大鼠、小鼠、恒河猴等动物上已有冷冻卵巢组织移植后恢复生殖力的报道。在2004年［4］Donnez等报道了首例冷冻人卵巢组织移植后获得妊娠的病例。 1.2 影响卵巢组织冷冻保存效果的因素 1.2.1 冷冻损伤 从低温生物学角度来看，冷冻卵巢皮质组织富有挑战性，因为卵巢皮质中包含许多不同类型的细胞，比如基质细胞、卵泡、颗粒细胞和膜细胞。此外，血管和神经对于移植卵巢功能的恢复也很重要。因此，就需要一种渗透性好的冷冻保护剂，还应尽量避免其对细胞的毒性。 1.2.2 冷冻保护剂的毒性作用 冷冻保护剂的毒性依其化学特性、与细胞接触时间和温度的不同而不同，目前常用的冷冻保护剂有二甲基亚砜（DMSO）、丙二醇（PROH）、乙烯乙二醇（EG）及甘油。Newton等（1996）［5］研究发现，以DMSO、PROH、EG和甘油作为冷冻保护剂，将冷冻-解冻后的卵巢组织移植入免疫缺陷小鼠肾囊内是可行的，其中乙二醇作为冷冻保护剂移植物的存活率最高，甘油冷冻效果明显较其他保护剂差。Newton等（1998）［6］还研究了冷冻保护剂渗透组织的时间，以乙二醇的效果最好。目前，乙二醇已在临床上应用，解冻后的卵巢组织移植所获得的卵母细胞有受精能力［7］。但是，对于不同类型的细胞和组织，均应考虑所选择冷冻保护剂是否为低毒的、具有最佳渗透力的以及形成冰晶最少具组织特异性的［8］。在选择冷冻保护剂时，可以将几种混合使用，效果往往优于使用单一的冷冻保护剂。 1.2.3 冷冻方法 传统的卵巢组织冷冻多采用Oktay等于1998年提出的慢速冷冻-快速解冻的方法，但该方法操作比较复杂，且慢速冷冻往往会导致冰晶的形成，造成渗透损伤。目前采用的慢速程序控制降温的冷冻方法，不仅费时、消耗液氮量多，而且需要专门的仪器，一般实验室不易实施。为了移植能够成功，选择最佳冷冻方法来获得质量最好的卵巢组织是很重要的，很多研究都关注于解冻后卵泡的分化，卵母细胞的形态、发育和受精情况。由于玻璃化冷冻技术具有操作简单、不易形成