基质金属蛋白酶-7、-9及其抑制剂-2与置IUD后慢性子宫内膜炎的关系.docVIP

基质金属蛋白酶-7、-9及其抑制剂-2与置IUD后慢性子宫内膜炎的关系 【摘要】目的　探讨基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、MMP-9及其抑制剂-2(TIMPS)与置宫内节育器(IUD)后慢性子宫内膜炎的关系。方法　选取丰南区计划生育服务站因症取环的育龄女性共637例，经病理诊为慢性子宫内膜炎20例为试验组，另取同期放置与未放置IUD的正常子宫内膜各20例为对照组。用免疫组化法检测MMP-7、MMP-9、TIMP-2在3组内膜中的表达。结果　MMP-7、MMP-9在置IUD后慢性子宫内膜炎中表达的平均光密度值高于两个正常子宫内膜组，差异有统计学意义(P=0.000)。TIMP-2在3组中的表达差异无统计学意义(P=0.163)。MMP-7和MMP-9在子宫内膜炎中表达具有相关性(P=0.024);MMP-7与TIMP-2、MMP-9与TIMP-2在子宫内膜炎中的表达无相关性(P=0.693，P=0.743)。结论　MMP-7和MMP-9在置IUD后发生的慢性子宫内膜炎中高表达，可能与其发病有关;TIMP-2在置IUD后发生的慢性子宫内膜炎中无高表达。 【关键词】 基质金属蛋白酶;基质金属蛋白酶组织抑制剂;宫内节育器;慢性子宫内膜炎;免疫组化 随着宫内节育器(intrauterine devices，IUD)的普遍使用，其并发症也在不断突显，尤其置IUD后并发慢性子宫内膜炎(chronic endometritis，CE)，会引发子宫异常出血、不孕等，给女性造成疾病的同时又影响IUD的推广使用。为此倍受专业人员的关注，研究也在不断深入。近年来，有关基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)、及其组织抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinase，TIMPS)参与组织修复、炎症反应和肿瘤浸润转移的研究，对于探讨其发生机制、寻找有效的治疗药物以及预防显得尤为重要。 1　资料与方法 1.1　一般资料 收集2010年6至12月在丰南区计划生育服务站因症取环的育龄女性共637例，经病理诊断为CE的组织标本20例作为试验组(A组)，记录资料完整，排除其他疾病，就诊前6个月均未进行过抗炎治疗及激素治疗，上述标本均经病理证实为增生期子宫内膜。另选取同期置器与未置器的健康育龄女性的正常子宫内膜组织标本各20例作为2个对照组(B组、C组，因子宫脱垂和卵巢囊肿住院手术前行取环诊刮术)。3组人群均在知情同意的情况下、均经病理确定为增生期子宫内膜。3组放置IUD的时间均是在月经干净3～5 d、无生殖道炎症等合并症、年龄差异也无统计学意义(P0.05)。 1.2　主要实验试剂 (1)即用型鼠抗人MMP-7单克隆抗体2M-0334北京中杉生物技术有限公司。(2)即用型兔抗人MMP-9单克隆抗体2A-0336北京中杉生物技术有限公司。(3)即用型兔抗人TIMP-2单克隆抗体HC-5539北京中杉生物技术有限公司。(4)通用型免疫组化SP检测试剂盒PV-9000 北京中杉生物技术有限公司(试剂盒组成：溶液A：蛋白阻断液;溶液B：生物素化二抗;溶液C：辣根过氧化物酶标记的链霉菌抗生物素蛋白)。(5)二氨基联苯胺DAB显色试剂盒FL-6001 北京中杉生物技术有限公司(溶液A：DAB显色剂;溶液B：底物H2O2)。 1.3　实验方法 采用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的过氧化物酶(stre Ptavidin-Perosidase)来测定细胞和组织中抗原的方法即SP法。各步骤均严格按试剂盒要求，MMP-7、MMP-9选用已知的乳腺癌细胞作为阳性片对照，TIMP-2用已知的膀胱癌细胞作为阳性对照。阴性对照选用PBS缓冲液代替一抗。 1.4　结果判定 观察结果采用双盲法，由两位有经验的病理科医师同时进行。MMP-7、MMP-9、TIMP-2均以镜下上皮细胞胞浆、胞膜或间质中出现棕黄色颗粒为阳性判定标准。根据着色强度分为4级：无着色为阴性;浅黄色为弱阳性;棕黄色为阳性：棕褐色为强阳性。图像采集及定量分析采用麦克奥迪数码医学图像分析系统(Motic.Med)，在times;200的高倍视野下，每张切片随机选取5个阳性视野，每个视野系统随机测定3个不同部位，提取阳性细胞数，测定光密度值，以反应染色强度。选取空白区定标，最后取得3组内膜组织中MMP-7、MMP-9、TIMP-2阳性部位的平均光密度(OD)值。 1.5　统计学分析 应用SPSS17.0统计软件，计量资料以x-±s表示，两组均数间比较采用LSD检验，多组均数间比较采用One-way ANOVA分析，P0.05为差异有统计学意义。 2　结果 2.1　MMP-7、MMP-9在3组子宫内膜中的表达 MMP-7在置IUD后CEA组中表达