基质金属蛋白酶MMP1及其抑制因子TIMP1在子宫内膜异位症中的表达及意义.docVIP

基质金属蛋白酶MMP1及其抑制因子TIMP1在子宫内膜异位症中的表达及意义 【摘要】目的研究基质金属蛋白酶1（MMP1）及其抑制因子TIMP1mRNA和蛋白在子宫内膜异位症（EMs）异位和在位内膜组织中的表达，探讨其在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法应用反转录聚合酶链反应（RTPCR ）和免疫组化SP法检测43例EMs的异位和在位内膜及20例正常子宫内膜中MMP1，TIMP1mRNA及蛋白的表达水平。结果在EMs异位内膜中MMP1mRNA及蛋白均呈高表达，TIMP1mRNA及蛋白均呈低表达，与EMs在位内膜和正常内膜相比，差异有显著性，P＜0．05。MMP1/TIMP1比值在异位内膜和在位内膜分别为1．46±0．57，1．15±0．38，均显著高于正常内膜（P＜0．05）；而且异位内膜中比值＞1的几率（33/39，846%）明显高于在位内膜（P＜0．05），两者呈显著负相关。异位内膜组织中MMP1，TIMP1mRNA及蛋白的表达无周期性变化，但与rAFS临床分期有相关性（P0．05）。结论异位内膜组织中MMP1高表达，TIMP1低表达，导致MMP1/TIMP1平衡失调，使异位内膜组织具有更强的侵袭能力，在EMs的发生发展中发挥重要作用。 【关键词】 子宫内膜异位症；基质金属蛋白酶；金属蛋白酶组织抑制因子；反转录聚合酶链反应；免疫组织化学　子宫内膜异位症（EMs）是妇科常见的一种良性病变，但却具类似恶性肿瘤的生物学行为，其发病机制至今尚未阐明。近年研究表明，细胞外基质（extracellular matrix， ECM）的降解与重建是异位内膜侵袭并种植于腹膜的关键因素[1]。基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是一组锌依赖性的、在结构上高度同源的蛋白水解酶，是降解ECM成分的最显要的一组酶类[2]，其活性在体内受到天然组织抑制剂金属蛋白酶组织抑制因子（tissue inhibitor of matrix metalloproteinases，TIMPs）的特异性抑制。MMPs与TIMPs间的平衡调节对于协调ECM降解与重建、维持ECM内环境稳定和结构完整具有重要作用。目前研究表明EMs患者的在位及异位子宫内膜均可分泌MMPs及TIMPs，推测其在EMs的发生发展中可能具有重要意义。本实验应用免疫组化SP法和RTPCR技术检测子宫内膜异位症异位和在位内膜中MMP1 和TIMP1 的表达，以探讨MMPs/TIMPs在EMs发生发展中的作用。 1 材料和方法 1．1 对象 45例EMs异位内膜组织标本均来自本院2003年7月mdash;2005年4月因EMs而行手术的患者，平均年龄（35．5±6．4）岁，其中增生期25例，分泌期20例。根据rAFS分期标准，Ⅰ~Ⅱ期20例，Ⅲ期16例，Ⅳ期9例。22例EMs在位内膜标本取自上述因EMs行子宫切除的患者，其中增生期14例，分泌期8例。另取同期因子宫肌瘤而行子宫切除术患者正常子宫内膜20例为对照组，平均年龄(35．5±4．8)岁，其中增殖期子宫内膜12例，分泌期8例。所有患者术前3个月内均未接受任何激素治疗，术后均经病理学诊断证实。月经周期的划分根据末次月经及子宫内膜病理检查结果确定。 1．2 试剂 MMP1 ，TIMP1 鼠抗单克隆抗体、SP试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司；反转录试剂盒、TRIzol试剂盒均为美国Promega公司产品。引物由上海生工生物工程公司合成。 1．3 检测方法及结果判定 1．3．1 免疫组化SP法 试验步骤按说明书进行，DAB显色，PSB代替一抗作阴性对照，已知阳性染色的乳腺癌组织切片为阳性对照。阳性细胞为光镜下细胞浆或胞膜中出现明确的棕黄色颗粒，参照Shimizu等[3]方法，随机选取5个高倍视野，综合染色强度和阳性细胞分布进行分析。 1．3．2 RTPCR 总RNA的提取利用TRIzol试剂盒完成，cDNA合成参照反转录试剂盒标准条件进行，所得cDNA用作模板进行PCR扩增。MMP1的引物序列为5CGACTCTAGAAACACAAGAGCAAGA3及5AAGGTTAGCTTACTGTCACACGCTT3；TIMP1的引物序列为5ATCCTGTTGTTGCTGTG3及5GACTGGAAGCCCTTTTCAGA3 反应；内参照GAPDH基因的引物序列为5CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA3及5ATGATCTTGAGGCTGTTGTCAA3。三者的扩增片段分别为786 bp，520 bp及450 bp。MMP1和GAPDH的扩增参数为95℃ 45 s，57℃ 45 s，72℃ 1 min，33个循环，最后72