生物学试验指导.DOC

实验一 显微镜的构造和使用 目的要求 1．熟悉显微镜的结构和主要功能。 2．掌握低倍镜和高倍镜的使用方法。 3．了解显微镜的维护方法。 实验用品 一、器材 普通光学显微镜。 二、材料 1.家兔肌肉、肝、脾及肾组织切片。 2.光学显微镜构造图、擦镜纸。 三、试剂 擦镜油（100%酒精和乙醚等量混合）、香柏油。 显微镜的类型 一、光学显微镜 (一)普通光学显微镜 普通光学显微镜（ordinary light microscope，OLM）是应用最为广泛的显微镜，放大倍数为1,000～1,500倍。用于观察细胞的一般形态结构，可看到细胞核、核仁、细胞膜、线粒体、中心体、高尔基复合体及染色体等。 (二)倒置显微镜 倒置显微镜（inverted microscope）的物镜位于标本的下方，光源位于标本的上方。该种显微镜主要用于细胞培养等活体标本的观察。 (三)暗视野显微镜 暗视野显微镜(dark field microscope)的特点是使用中央遮光板或暗视野集光器，使光线通过集光器透镜边缘，倾斜地照射在标本上，经标本的反射或散射后，再射入物镜内，因而整个视野是暗的，所观察到的是被检物体的衍射光图像。暗视野显微镜一般用于观察微小生物的运动、活细胞的结构及细胞内微粒的运动等。 (四)荧光显微镜 荧光显微镜（fluorescence microscope）是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等）组成。荧光光源一般采用超高压汞灯(5O～200W)，经过激发滤片系统发出一定波长的激发光（如紫外光或紫蓝光），激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光，再通过物镜、目镜的放大进行观察。荧光显微镜主要用于研究细胞的结构、功能及化学成分等。 (五)相差显微镜 相差显微镜(phase contrast microscope)的主要结构特点是光学系统中有一套特殊装置(如环状光圈和带相板的物镜等),能改变直射光或衍射光的相位；并利用光的衍射和干涉现象，把相差变成振幅差(明暗差),增强反差，以利于观察活体标本或未经染色的标本。 (六)共焦点激光扫描显微镜 共焦点激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscope，CLSM)的特点是物镜和聚光镜同时聚焦到一个小点,即共聚焦。其优点是实现了点照明,保证只使来自聚焦点的光成像,再加上图像信息的计算机三维重建处理,使观察的标本图像更加清晰。共焦点激光扫描显微镜可用于活体胚胎,大脑皮层内微循环，细胞内网络结构如内膜系统、细胞骨架及原位染色体等的观察。 (七)电视显微镜 电视显微镜(video microscope)又叫智能显微镜,它是将普通光学显微镜与彩色高分辨摄像头、高保真录像机和彩色监视器结合制成,使观察效益得到很大的提高并能有效记录。如配上彩色高分辨数码相机、高清晰度彩色打印机,就可在观察标本的同时得到高清晰度图片。 二、电子显微镜 德国科学家Max Knolls 和Emst Ruska于1932年发明了电子显微镜(electron microscope)。电镜的发明和应用,使细胞生物学的研究由显微水平跃进到亚微水平,巨大地推动了细胞生物学的发展。 (一)透射电子显微镜 透射电子显微镜(transmission electron microscope，TEM)由电子枪发射的高速电子束(电子射线),经高压加速和聚光透镜的聚焦,然后穿过样品,再经过多级电磁透镜(物镜、中间镜、投影镜)的放大,最后将高度放大的图像显示在荧光屏上或记录在照相装置中。用于透射电镜观察的样品,必须做成超薄切片，一般厚度为30～60nm。 (二)扫描电子显微镜 扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)是利用由电子枪发射出并经过加速、聚集形成的一束很细小的电子束,在样品表面扫描,电子束中的电子与样品中的原子作用,可产生二次电子。二次电子信号的大小依样品表面的外形而异,因而利用反射回来的二次电子信号,经收集放大,在荧光屏上显示出样品表面高度放大的立体图象。用于扫描电子显微镜观察的样品不必作成超薄切片,制备较简单。 (三)扫描隧道电子显微镜 1981年，由IBM苏黎世实验室的Bining等人发明了扫描隧道电子显微镜（scanning tunneling microscope,STM），该成果获1986年度的诺贝尔物理学奖。STM是根据量子隧道效应而设计,可在原子水平上显示物体的表面结构。其分辨力在常温常压下可达纳米以下,高于透射电子显微镜。用扫描隧道电子显微镜可直接观察DNA、DNA-蛋白质的表面形态,也可对生物膜进行分析。 此外,还有几种电子显微镜,如超高压电子显微镜(ultravoltage electron microsco