基因工程第五章章 基因工程基本技术 知识.ppt

第五章 基因工程的基本技术;第一节 凝胶电泳技术;原理;影响电泳迁移速率的四大因素：;;3）构型;不同构像质粒;2.支持物介质 ;3.电场强度;4.缓冲液离子强度;琼脂糖凝胶电泳的操作过程;步骤;;紫外线光源灵敏度: 302nm254nm366nm;结果与分析;琼脂糖凝胶电泳装置;实验步骤;;;;;;﹢;脉冲电场（PFGE） 解决大分子DNA电泳问题 ;;第二节 核酸分子杂交;变性;Blotting;定义：;带有DNA片段的凝胶;;Southern Blot Part I: Gel electrophoresis followed by transfer to a membrane;Southern Blot Part II: Hgybridization of DNA on membrane to specific probe;DNA stained with ethidium bromide;Northern Blot probed with b-globin;Making a probe;1、标记的种类 同位素： 32P、35S、3H、125I等标记探针 非同位素： 生物素、地高辛配体、荧光素等作为标记物 两者比较：后者不及前者敏感，但后者保存时间较长，无同位素污染。 ;探针的标记方法;缺口平移法的原理;随机引物标记法原理;末端标记法原理;生物素光照