CPP中活性组分P5检测方法.docx

华南农业大学综合性实验报告 实验项目名称：CPP中主要活性组分P5的检测 实验项目性质：综合性实验 所属课程名称：食品仪器与分析综合实验1 实验试剂与仪器1.1仪器：岛津高效液相色谱仪、超声波清洗仪、超纯水制备仪、千分之一天平、离心机1.2试剂：P5标准品、三氟乙酸、超纯水、CPP2 试验方法及原理采用高效液相色谱法能在较短时间内完成测定。在以P5标准品保留时间定性，采用外标法定量CPP中P5含量。2.1.标准曲线方程式为：Y=aX+b2.2根据标准曲线方程得到计算公式 ：X1=(Y1-b)/a（X1为样品中维C浓度，Y1为样品峰面积）2.3.最后求出：C13 实验步骤3.1 标准液的制备：用千分之一天平准确P5标准品1mg、2mg、3mg、4mg、5mg分别溶于1ml超纯水中，混匀使其溶解，超声波振荡5min，用0.45滤膜过滤，备用。3.2 样品的前处理：准确称取CPP固体样品50mg，用超纯水溶解，定容至10ml，混匀使其溶解，超声波振荡5min，用0.45m滤膜过滤，进样。3.3 实验条件的选择3.3.1色谱柱C18(250mm*4.6mm)3.3.2流动相A：水+0.1%TFA（三氟乙酸） 流动相B：乙腈+0.1%TFA（三氟乙酸）流量1mL·min-13.3.3检测器紫外检测器，215nm3.3.4进样量：20μL3.3.5液相方法：保留时间 B浓度0.01 5% 19.5 18% 49.5 30% 59.5 90% 69.5 5% 70.5 stop3.4 测定3.4.1将配制好的流动相A和流动相B置于超声波发生器上脱气20min。3.4.2根据实验条件，将高效液相色谱仪按照操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡时即可进样。3.4.3依次分别吸取20μL的标准品使用液和未知试液进样，记录各色谱图。4 实验结果4.1 实验得各P5标准溶液1mg/m、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml的色谱图如下：P5 1mg/mlP5 2mg/mlP5 3mg/mlP5 4mg/mlP5 5mg/ml不同浓度p5的比较4.2 测得未知未知样品Cpp 色谱图，如下样品1：样品2：样品34.3标准样品浓度与峰面积关系表P5浓度mg/ml12345峰面积190423229110294858750638644283670934.4标准曲线图由标准样品浓度与峰面积关系表，可制得标准曲线图，并求出标准曲线方程式。由上图可知，标准曲线方程式为Y= 2E+06X- 34831，R2 = 0.9904.也即Y= 2×106X-34831。根据标准曲线方程得到计算公式 ：X=(Y+34831)/（2×106）4.5所测样品峰面积由实验所得的两个样品的色谱图中，可以判断出P5所在的峰，及读出其对应的峰面积。样品序号123峰面积3611216497346429745424.6所测样品中P5浓度将实验所得的3种样品对应的峰面积代入所求得的标准曲线方程式，求出对应的P5浓度。所求结果如下表：样品序号123P5浓度mg/ml1.823022.504151.504695 实验讨论5.1 定性分析通过比较各P5标准溶液的浓度及其对应的峰面积的关系表可以得出，P5浓度越大的溶液其对应的P5的峰面积越大。比较3种样品实验所得的色谱图，读出对应的P5峰面积，并做出比较，可得：峰面积：样品2样品1样品3，则其对应的P5浓度之间存在的关系：样品2样品1样品3。5.2 定量分析 通过实验得到各P5标准溶液1mg/m、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml的色谱图，积分求得峰面积，并经过数据处理，得出浓度-峰面积的标准曲线方程式。 再通过实验分别得出3种样品对应的色谱图，积分求得其峰面积，将峰面积代入浓度-峰面积的标准曲线方程式，可分别求出其对应的P5浓度，分别是：1.82302mg/ml，2.50415mg/ml，1.50469mg/ml。也即3种样品中的P5浓度的大小关系：样品2样品1样品3。5.3 误差讨论 由公式算得的数据，与标准图相比还是有些许误差。由公式算得的的峰面积都稍比标准图的值大。有可能是使用仪器时泵流量或者电压不稳定，也可能出现保留时间漂移。但总的来说这组数据还是算成功可行的。