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基因工程讲义 授课教师：杨柯金 授课教师：杨柯金 授授课课教教师师：：杨杨柯柯金金 持有者：田亚楠 持有者：田亚楠 持持有有者者：：田田亚亚楠楠 2010年6月 2010年6月 年66月月 目 录 第一章 基因工程概述 第二章 分子克隆工具酶 第三章 目的基因的提取 第四章 基因工程载体 第五章 连、转、筛 第六章 表达 第七章 植物基因工程 第八章 动物基因工程 附：PCR 第一章 基因工程概述 基因工程原理 一、基因工程的概念 1.基因工程的概念 基因工程也称为基因操作或DNA重组技术，是20世纪70年代以后兴起的一门新技术。 基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之掺入到原先没 有这类分子的寄主细胞内，而能持续稳定地繁殖。 基因工程创造新生物，并给予新生物以特殊功能。 通过基因操作来定向改变或修饰生物体或人类自身,并具有明确目的的活动称为基因工程。 主要原理是应用人工方法把生物的遗传物质，通常是脱氧核糖核酸（DNA）分离出来，在体外进行切割、拼接和 重组，然后将重组了的DNA 导入某种安全无害宿主细胞或个体，从而改变它们的遗传特性，有时还使新的遗传 信息在新的宿主细胞或个休中大量表达，以获得基因产物（多肽或蛋白质）。 目的基因 基因载体 重组体 总体技术路线 分→切→接→转→筛→表← 基因操作（genemanipulation）：对基因进行分离、分析、改造、检测、表达、重组和转移等操作的总称。 仅将基因作为一段DNA分子来操作，进行分析、修饰或转移属于生物化学或遗传学的范畴 只有当基因能够进行大量、可操作性的扩增时才进入基因操作的范畴 基因工程通过基因操作来实现，基因操作是实现基因工程的必需途径 基因重组和基因工程之间关系： 重组DNA技术是用酶学方法将不同来源的DNA在体外切割、连接、组成一个杂合DNA分子的技术。 基因工程是通过基因重组来实现，但基因重组并不都是严格意义上的基因工程 基因工程专指为实践应用而进行的基因重组事件，产生的基因工程体可以是生物反应器（如生产酶或活性物质等） 改变了生物性状的工程体（改良生物体品质） 2. 基因工程的诞生与发展 第一个进行基因重组的是美国斯坦福大学的Paul Berg及其同事，他们于20世纪70年代把大肠杆菌和病毒 的DNA连接起来 1973年美国加里福尼亚大学的赫伯．博耶(HerbertBoyer)和斯坦福大学的斯坦利．科恩(stanleyCohen)为首的 研究小组成功的进行的两个基因重组实验第一次 实现了基因工程的实践，揭开了基因工程的序幕 基因工程诞生的理论基础 20世纪40年代，确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载是DNA 而不是蛋白质，从而明确了遗传的物质基础 问题。 20世纪50年代，揭示了DNA 分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理，解决了基因的自我复制和传递问题。 20世纪50年代末期和60年代，相继提出了“中心法则”和“操纵子学说”，并成功地破译了遗传密码，从而阐明了 遗传信息流向和表达问题。 2.1 基因是基因重组的物质基础 孟德尔 基因作为独特的独立单位而代代相传。细胞中有成对的基本遗传单位，在杂种的生殖细胞中，成对的遗传单 位一个来自雄性亲本，一个来自雌性亲本，形成配子时这些遗传单位彼此分离。 约翰逊 1909年，丹麦生物学家约翰逊（WilhelmLudwig Johannsen，1857～1927）根据希腊文“给予生命”之义，创造了基 因（gene）一词，并用这个术语代替孟德尔的“遗传因子”。不过他所说的基因并不代表物质实体，而是一种与细 胞的任何可见形态结构毫无关系的抽象单位。因此，那时所指的基因只是遗传性状的符号，还没有