免疫分析1.pptxVIP

所谓免疫分析(Immunoassay)是指利用抗原(Antigen)与抗体(Antibody)之间高特异性的反应(即免疫反应)实现对抗体、抗原或相关物质进行检测的分析方法。将抗体(Ab)固定于一个固相载体上，然后抗原(Ag)与标记抗原(Ag*)竞争性地与固定化的抗体反应；将未反应的抗原(通常是被分析的对象)及标记抗原洗去；检测标记抗原的量，其浓度的大小与待测抗原的量成反比。根据标记物的不同可分为放射免疫分析和非放射免疫分析两大类。竞争免疫分析示意图8.1. 抗原、抗体及其反应 抗原和抗体的性质及它们间的反应是建立免疫分析的基础。虽然从表面上看它们之间的反应与一般的化学反应很相似，但在实际应用时要比一般的试剂分析复杂得多。只有对它们的性质有了很好的了解,才能建立一种真正有效的分析方法。 8. 1.1 抗原 在免疫分析中抗原往往作为被分析的对象出现，对它的了解包括与抗体制备相关的性质及抗原标记两个方面。基本概念 能引起动物机体特异性免疫应答的化学物质叫抗原(Antigen, Ag)，通过这种免疫应答所产生的，能够与抗原发生特异性反应的蛋白质就是抗体(Antibody, Ab)。抗原具有免疫原性(Immunogenicity)和抗原性(Antigenicity)两种特性。 免疫原性是指引起免疫应答的性质，而抗原性则是指与抗体反应的性质，两者并不一致。具有免疫原性的物质必然有抗原性，反之则不一定成立，如半抗原(Hapten)，它具有抗原性，但不具备免疫原性。 半抗原是指那些不能引起免疫应答，却能与抗体反应的一类小分子，它们相当于抗原分子上的一个抗原决定簇(Determinant)，即抗原分子上与抗体结合的一个区域。一般来说，抗原并没有明显的结构特征使之与非抗原化学物质得以区别，所以关键要看它是否能引发免疫应答。抗原性的化学基础 抗原性与抗原的化学结构有着密不可分的关系，它不仅与高特异性、高亲和性抗体的制备相关，而且与免疫分析中标记抗原的设计有关，尤其是对与半抗原相关的分析体系更是如此。抗血清对半抗原及其类似物反应的特异性研究示意图抗血清与抗原及其类似物沉淀反应的情况(沉淀量)注：符号“＋”代表有沉淀，“－”代表未观察到沉淀，“±”代表有沉淀和没有沉淀之间免疫原性的化学基础 化合物免疫原性的化学基础并不像抗原性的化学基础那样清楚，但发现它也与其结构紧密相关。抗原的一些特征如下： (1)抗原对免疫对象来说是外来物质，也就是说，抗原的结构要新异，要使生物体能够识别它是非己的，这样才能有效地刺激免疫系统产生免疫应答，即具有免疫原性。 例如，兔子可以对人血清白蛋白产生免疫应答，但不会对兔血清白蛋白产生免疫应答。 (2)抗原一般都是一个复杂的大分子，其分子量一般大于5000，这里复杂不仅指要有比较大的分子量，而且在组成及立体化学结构上也要具有复杂性，而不是一个简单的聚合物，如尼龙、聚苯乙烯及聚丙烯酰胺．它们的分子量虽然都很大，但不具有免疫原性。 关于分子大小的要求这一点并不绝对，如人们已发现砷酸、酪氨酸、赖氨酸取代的2，4－二硝基苯及胰岛素(分子量约为1500)等小分子量的化合物也具有免疫原性。 (3)抗原的免疫原性还与免疫原的分子表层基团有关，对蛋白质抗原。它还与氨基酸的组成相关。例如，多聚赖氨酸无免疫原性，在其外层接上一层丙氨酸或甘氨酸，它仍无免疫原性，但若外层接的是酪氨酸，则它会表现出免疫原性．由此可见，带芳香环氨基酸，或者说结构较为复杂的氨基酸对免疫原性有重要的贡献。8.1.2 抗体 抗体是一类统称为免疫球蛋白(Immunoglobulin，简写为Ig)的蛋白质。是机体免疫力的一类重要物质基础，也是医学中用于疾病诊断、治疗、预防和研究发病机理的极为重要的试剂及制剂。抗体的性能对免疫分析是至关重要的。IgG 分子的基本结构Porter，1962 免疫球蛋白是具有抗体活性的一类蛋白质，目前被人们所认识的免疫球蛋白可分为IgG、1gM、IgA、IgI)和IgE五种类型，分别称作免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、……。用免疫学方法研究表明，这五种类型免疫球蛋白的主要区别在于重链序列的不同．但链的长度基本相同。轻链的变化要相对小一些，只有?和? 两种类型的链。虽然所有的抗体都是免疫球蛋白，但也有一些免疫球蛋白不具备抗体的活性。五种免疫球蛋白的主要功能也各不相同。五种免疫球蛋白的比较抗体的制备 多克隆抗体：从特定的抗原免疫动物中提取的含有抗体的血清称之为抗血清。在许多分析应用中并不需要把抗体从血清中分离出来。这种抗血清会因不同动物，甚至是同种动物的不同的个体由于遗传性的差异，而导致所得抗体并非均一物质，特别是抗体的特异性及亲和力几乎每批产品都不相同，通常称这类抗体为多克隆抗体。 单克隆抗体：因为抗体由B细胞所产生，设法将单个B细胞分离出来加以大量的增殖形