免疫学进展1.pptxVIP

免疫学技术发展的历史 免疫学技术发展的现状 免疫学技术研发和应用的展望;现代免疫学技术：具有高特异性、高灵敏性及其微量化检测的特点，几乎可以在体液、细胞以及组织等多个层面，进行定性、定位以及定量检测各种物质，并能高效纯化蛋白和分选细胞。已成为生物制药、研究细胞发育、分化、凋亡以及干细胞移植等领域不可或缺的实验手段。 学习免疫学技术的发展历史，希望通过了解免疫学技术的创建过程，能够给从事相关研究者带来创新思维的启迪；另外，了解现代免疫学技术的进步及其在科学研究领域的应用，希望能为相关学科的研究开辟新的思路。 ;免疫学技术发展的历史 1890年德国学者Behring和日本学者Kitasato 应用白喉外毒素免疫动物，发现在其血清中存在可与外毒素结合的物质，并命名为抗毒素。1891年Behring应用免疫动物抗血清成功治疗了一例白喉患者，这是利用抗毒素被动免疫治疗疾病的第一个实例，Behring也因此贡献，于1901年获得首届生理学医学诺贝尔奖。 伴随抗体及补体的发现，定性、定量及定位检测抗原、抗体以及补体的免疫学方法逐步建立。 ; 一、经典免疫学技术 1、血清学检测技术的建立 凝集反应、沉淀反应、补体结合试验、琼脂凝胶免疫扩散技术、免疫溶血空斑试验等。 1896年Max G和Herbert D发现颗粒性抗原细菌与抗血清反应，在适当电解质存在条件下可以出现肉眼可见的凝集现象，即细菌凝集反应。1902年Landsteiner K建立了血型凝集试验，最终确定了人类ABO血型，奠定了同型血输血的基础，Landsteiner本人也因发现人类血型的伟大贡献于1930年获得生理学医学诺贝尔奖。;1897年鲁道夫·克劳斯（Rudolph Kraus）发现细菌毒素与抗毒素作用出现沉淀反应，即可溶性抗原与抗体在电解质参与下出现的肉眼可见的沉淀现象。 1948年Jacque O和Orjan O进一步建立了琼脂凝胶免疫扩散技术。;2、免疫化学研究;图2 修饰抗原与抗体反应; 1939年阿恩·提塞留斯（Arne Tiselius）和埃尔文·卡巴特（Alvin Kabat）利用血清电泳技术确定人外周血白蛋白、α、β及γ球蛋白，发现抗体结构属于γ球蛋白。;二、现代免疫学技术;1、标记抗原-抗体技术的建立 1941年艾伯特??孔斯（Albert H Coons）创建免疫荧光技术。 1955年Coons、Leduc和Connolly等进一步发展和完善了荧光抗体免疫组织化学染色技术，免疫荧光技术通常是指利用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）以及藻红蛋白（phycoerthrin，PE）等荧光物质标记抗原或抗体，用以检测相应抗体或抗原的技术。;免疫荧光染色结果;放射性免疫检测技术;;51Cr释放法检测细胞毒示意图; Sternberger L建立了免疫酶技术（EIA），其原理是利用酶替代同位素标记抗原或抗体，抗原与抗体反应后，通过酶作用于底物出现的颜色反应强弱，确定抗原或抗体的量。 1971年Engvall和Perlaman等又创建了非均相酶免疫技术——酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA），其原理是利用酶标记抗原或抗体，再与结合在固相支持物上的抗原或抗体反应，由于形成的酶标记抗原-抗体复合物结合在固相支持物表面，而未结合的酶标记抗原或抗体则存留在液相中，通过洗涤固相物而将游离抗原或抗体与结合的抗原-抗体复合物分开 。;酶免疫细胞化学染色结果 ;1971年Faulk和Taylor将胶体金与抗体结合，再与相应抗原反应，建立了早期的免疫胶体金电子显微镜技术。胶体金颗粒具有电子密度高的特点，电子显微镜下呈黑色颗粒状。 研究发现胶体金颗粒的颜色与颗粒大小有关，当胶体金颗粒直径大于20nm时，呈现砖红色，颗粒更大时肉眼可见。因而利用胶体金技术相继开发出胶体金快速斑点渗滤技术，用于临床快速诊断，如在临床诊断中使用的人绒毛膜促性腺激素（HCG）快速诊断玻璃纤维滤纸。 ;1978年Velan和Halman又进一步建立了高敏感性的化学发光免疫测定法（chemiluminescence linked immunoassay，CLIA）。 其原理是过氧化物酶可促进底物（H2O2）释放O-离子作用于鲁米诺（5-氨基-2,3-二氢-1,4酞嗓二酮），在碱性溶液中激发形成的氨基肽酸盐产生能量，以可见光的形式迅速释放，借助光学仪器可以检测到发光强度，该强度与抗原标记的酶的多少有关，即与抗原-抗体结合水平有关。 ;随着现代分子免疫学技术的发展，1981年美国斯坦福大学的Stark G等在DNA杂交技术的基础上，发明了蛋白质印迹技术（West