第3章 真菌生物学检验基本技术 知识.pptVIP

本法主要用于头癣检查。病发在滤过紫外灯照射下可发出不同色泽的荧光，如黄癣菌病发呈暗绿色荧光，白癣小孢子菌属的病发呈亮绿色荧光等。 （三）荧光检查 第三节　深部感染真菌 深部真菌是侵犯皮下组织和内脏，引起全身性感染的真菌。 多数能引起慢性肉芽肿样炎症、溃疡及坏死等病变 ①致病性真菌 正常人体内部不存在，一旦侵入机体，即可致病，如组织胞浆菌、球孢子菌、芽生菌等。属外源性感染致病菌； ②条件致病性真菌 是人体正常菌群的成员，当机体抵抗力和免疫力下降时可致病，如新型隐球菌、白色念珠菌、曲霉菌和毛霉菌等。 深部感染真菌分类 一、白色念珠菌 白色念珠菌（canidia Albicans）又称白色假丝酵母菌，广泛存在于自然界，也存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病 。 为条件致病性真菌。 （一）生物学特性 卵圆形，大小2μm×4μm，革兰氏染色阳性。 有假菌丝。 培养特性：典型类酵母型菌落，表面光滑，呈灰白色或奶油色，有酵母气味。 涂片镜检，可看到表层为卵圆形芽生细胞，底层有较多假菌丝。 注意事项 ①采取部位要恰当。深部真菌感染可采取脓汁、痰液、血液、脑脊液等。浅部真菌感染，应刮取病变部位边缘的痂、鳞屑。发癣应取折断的病发等。 ②标本应新鲜。特别是深部真菌标本，尽量在取材后立即检查，最长不得超过两小时，如不能立即送检则必须放入冰箱中保存，尽速送检。 ③应在用药前采集标本。如已用药则需停一段时间药后再采集标本。 ④标本的采集量要充足。血液和脑脊液不得少于5ml，胸腔液不得少于20ml。活体组织要采取两份，一份送病理科检查，一份送镜检和培养。 ⑤避免污染杂菌。必须进行严格的无菌操作，必要时在培养基内加入抗生素类。 2．染色标本检查： ⑴革兰氏染色： 各种真菌均为革兰氏阳性，为深蓝色。常用于酵母菌、白色念珠菌、孢子丝菌、诺卡菌及组织胞浆菌等。 ⑵乳酸酚棉蓝染色 ⑶糖原染色：菌体均染成红色。用于标本直接涂片及组织病理切片染色。 ⑷嗜银染色（GMS）：染成黑色。 ⑸粘蛋白卡红染色法（MCS）： 主要用于新型隐球菌荚膜的染色。隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核呈黑色。 ⑹荧光染色： 主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组织切片。 菌 种 荧光反应 菌 种 荧光反应 白色假丝酵母菌 黄绿色 曲菌 绿色 新生隐球菌 红色 鼻孢子菌 红色 组织胞浆菌 红黄色 球孢子菌 黄绿色 皮炎芽生菌 黄绿色 常见深部真菌的荧光反应 （二）培养检查 用于确定菌种，辅助直接检查的不足； 通常用沙保氏培养基(Sabouraud,含1％蛋白胨、4％葡萄糖或麦芽糖、2％琼脂) （SDA）,22-28℃； 深部真菌可用血琼脂或脑心葡萄糖血琼脂37℃培养。 小培养法：小培养法是采用真菌培养板或普通载玻片进行真菌培养。培养物可直接于显微镜下检查，也可经染色后观察。 （三）免疫学试验 用于检测深部感染真菌的抗体，作为辅助诊断组织胞浆菌、念珠菌、曲霉菌。 检测深部感染真菌的抗原，用于早期、快速、特异的诊断。 乳胶凝集法检测新型隐球菌病患者的荚膜多糖抗原 ELISA法检测白色念珠菌感染者的甘露聚糖抗原 免疫荧光法检测孢子丝菌病患者的可溶性抗原 四、防治原则 真菌感染尚无特异预防，主要注意公共卫生和个人卫生； 碘化物治疗孢子丝菌病、毛霉菌病有一定疗效； 制霉素、灰黄霉素、克霉唑（三苯甲霉唑）等外用或内服对癣症和白色念珠菌病等有较好疗效； 近年报道5-氟胞嘧啶（5-FC）治疗单细胞真菌感染疗效显著； 二性霉素B可用于深部全身真菌感染。 第二节　浅部真菌 主要为丝状菌，多侵犯皮肤、毛发、指甲等角化组织引起癣症，又称皮肤癣菌(Dermatophytes)。分为三属，共37个种。 一、生物学特征 皮肤癣菌的特征 属名 种数 侵犯部位 形态特征 皮肤 指甲 毛发 大分生孢子 小分生孢子 菌 丝 毛癣 菌属 21 + + + 细长、棒形、壁薄， 少见或无 梨形、棒形， 较多见 螺旋状、鹿角状、结节状、球拍状、破梳状，单纯细菌丝 小孢子癣菌属 15 + - + 纺锤形，壁较厚， 较多见 棒形，卵圆形， 较少见 球拍状及破梳状菌丝 表皮癣菌属 1 + + － 梨形、壁较薄， 多见 无 单纯菌丝 角层癣菌 枇糠状鳞斑癣菌可引起汗斑 皮肤癣菌 含毛癣菌、表皮癣菌和小孢子癣菌三个属，主要侵犯角化的表皮、毛发和指（趾） 甲，引起皮肤癣病，包括手足癣、体癣、灰指甲、头癣等。 二、检验方法 直接采取病变部位的标本，用显微镜检查有无菌丝及孢子的存在，本法迅速简便，是临床真菌检查最常用的方法。 （一）直接镜检 皮下组织感染真菌 包括着色真菌和申克孢子丝菌。着色真菌可引起着色真菌病、肢体橡皮肿等；申克孢子丝菌可