基因工程疫苗讲解课件.pptVIP

HBV只有3200bp，为双链的DNA,是一个相当小的病毒。其基因组共有四个ORF，编码以下一些蛋白：Core蛋白和pre-core蛋白，Pol蛋白，X蛋白，以及S蛋白（L、M、S）。故重组酵母可用以下方法：? （1）.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列，用化学合成法直接合成目的基因或者通过鸟枪法克隆目的基因。用识别相同黏性末端的限制性内切酶将外源DNA和质目的基因分离?重组质粒的构建（切，接）?导入酵母细胞（转）?培养酵母细胞（增）?检测正确表达目的产物的酵母（检）? 粒分子切开。（切）?（2）.用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到质粒分子上，构成DNA重组分子。（接）?（3）.借组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。（转）?（4）.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分子。（增）?（5）.筛选和鉴定经转化处理的酵母细胞，获得外源基因高效表达的基因工程菌。（检 （1）目前存在的问题：人群中约10%左右对现有乙肝疫苗（仅含S抗原的疫苗）无反应； （2）研制方向：使用含前S（主要是前SI）的新一代乙肝基因工程疫苗，可使对现有S乙肝疫苗无反应的人群产生良好的免疫反应。目前，含前S的疫苗，新佐剂乙肝疫苗，乙肝抗原抗体复合物疫苗，治疗性乙肝研究的热点。 基因工程疫苗 基因工程疫苗：狭义的疫苗被称做传统疫苗（traditional vaccine），即完整的病原体为主制成的疫苗；而基因工程疫苗则属于新一代疫苗（New generation Vaccine）或高技术疫苗范畴（High-tech Vaccine）。 主要包括基因工程亚单位疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗、基因缺失活疫苗、蛋白工程疫苗等等，广义的还包括遗传重组疫苗、合成肽疫苗、抗独特型抗体疫苗以及微胶囊可控缓释疫苗等。 一、传统疫苗与新型疫苗的区别： 传统疫苗 ①疫苗的研制则主要是通过人体实验从经验与失败中获得。 ② 20世纪以来，随着病原学、流行病学、免疫学，特别是病毒组织培养技术的发展，大量传统疫苗相继问世。 ③免疫学的进展，使人们可以通过是否产生中和抗体判定疫苗成功与否。几乎所有免疫保护机制明确，可以产生中和抗体，又易于培养的疫苗都已获得成功。甚至一些新出现的疾病，主要具备上述特点，也可以使用传统疫苗技术迅速研制成功（表5-5）。 ④对于免疫保护机制不明确，有潜在致癌性或免疫病理作用，以及病原不能或难于培养的疫苗，使用传统疫苗技术就很难研制成功。 （一）基因工程疫苗 gene engineering vaccine 基因工程疫苗，也称遗传工程疫苗（genetic engineering vaccine），指使用重组DNA技术克隆并表达保护性抗原基因，利用表达的抗原产物，或重组体本身制成的疫苗。 主要包括基因工程亚单位疫苗，基因工程载体疫苗，核酸疫苗，基因缺失活疫苗，及蛋白工程疫苗等五种。 1、基因工程亚单位疫苗(gene engineering subunit vaccine) 基因工程亚单位疫苗又称生物合成亚单位疫苗或重组亚单位疫苗。是指利用DNA重组技术将编码病原微生物保护性抗原基因导入受体菌或细胞，使其在受体中高效表达，分泌保护抗原肽链继续保护性抗原肽链，加入佐剂及制成基因工程亚单位疫苗。 2、基因工程活载体疫苗（gene engineering vector vaccine） 基因工程活载体疫苗可以是非致病性微生物通过基因工程的方法使之表达某种特定病原物的抗原决定簇基因，产生免疫原性。也可以是致病性微生物通过基因工程的方法修饰或去掉毒性基因但仍保持免疫原性。 在这种疫苗中，抗原决定簇的构像与致病性病原体抗原的构象相同或者非常相似，兼有活疫苗和死疫苗的优点。在免疫力上很有优势。主要有基因突变疫苗和复制性活载体疫苗。基因突变体疫苗，这类疫苗是认为的将病原体的某个或某些基因全部或部分删除，使其毒力下降不在引起临床疾病但仍能感染宿主并诱发保护性免疫力 3、核酸疫苗（nucleic acid vaccine） 核酸疫苗(nucleic acid vaccine),也称基因疫苗(genetic vaccine),是指将含有编码的蛋白基因序列的质粒载体，经肌肉注射或微弹轰击等方法导入宿主体内，通过宿主细胞表达抗原蛋白，诱导宿主细胞产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。 核酸疫苗是利用现代生物技术免疫学、生物化学、分子生物学等研制成的，分为DNA疫苗和RNA疫苗两种。但目前对核酸苗的研究以DNA疫苗为主。DNA疫苗又称为裸疫苗，因其不需要任何化学载体而得此名。DNA疫苗导入宿主体内后，被细胞（组织细胞、抗原递呈细胞或其它炎性细胞）摄取，并在细胞内表达病原体的蛋白质抗原，通过一系列的反应