t-spot.tb 教学文稿.pptx

T-SPOT.TB 关于原理与临床应用的简述 T: T细胞 SPOT：ELISPOT (enzyme-linked immunospot assay；酶联免疫斑点技术)是一种从单细胞水平检测分泌抗体或细胞因子细胞的免疫学新技术。原理是用抗体捕获培养细胞分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色的方式将其表现出来。 TB：结核杆菌 优势 该检测方法采用的结核杆菌特异性抗原为ESAT-6和CFP-10，其编码基因RD1在BCG（卡介苗）和绝大多数非结核杆菌中是缺失的，因此较好的避免了交叉抗原反应，提高了特异性。 原理 1.从全血中分离出外周血单个核细胞PBMCs 2.将样本加入反应孔，每个样本需要4个检测孔： ①空白对照为了判断非特异细胞的活化反应 ②结核特异抗原A，Panel A(ESAT-6) ③结核特异抗原B，Panel B(CFP 10) ④植物血凝素PHA对照，用于判断PBMC活性 注：植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一种有丝分裂原，主要用于激活免疫细胞—淋巴细胞。是一种干扰素诱导剂，不仅可以刺激机体产生白介素-2和干扰素；还可以刺激机体产生非特异性抗体。由于其较难提纯，且成本极高，所以一直以来仅在实验室中作为刺激淋巴细胞增殖的试剂。 原理 3.孵育，刺激T细胞，分泌的细胞因子被预包被在反应孔膜上的特异抗体捕获 4. 洗涤、标记、计数。 临床应用 传染科/感染科： 1.2-3周以上的不明原因发热病人的结核感染排筛 2.免疫力低下患者肺外结核的辅助诊断卡介苗接种人群的结核感染筛查 3.HIV感染者并发结核的筛查T-SPOT.TB不受CD4细胞计数水平的影响，避免了HIV感染后细胞免疫功能受损而导致的假阴性结果。 呼吸科/结核科 呼吸系统疾病与结核鉴别诊断 胸水/心包积液鉴别诊断 菌阴肺结核的辅助诊断 肺外结核辅助诊断 特殊人群（矽肺等）的结核排筛 2-3周以上的不明原因发热病人的结核感染排筛 风湿免疫科 生物制剂/免疫抑制剂治疗前后的筛查 大剂量激素治疗前后的结核筛查 自身免疫性疾病与结核病的鉴别诊断 发热待查患者的结核排筛 消化科 腹水（结核性腹膜炎）待查 肠结核的鉴别诊断 发热待查 生物制剂治疗前结核筛查（克罗恩病，炎症性肠病） 儿科 儿童发热的结核感染筛查 原发性结核的辅助诊断 儿童肺外结核的鉴别诊断 卡介苗（BCG）接种-------PPD结果不准确 儿童肺结核---干咳、不排痰，其他方法很难诊断肺外结核比例高 谢 谢 ！