6.目的基因的表达.ppt

His4位点插入 转化子：GS115:His+Mut+ KM71:His+Muts 宿主株:GS115、KM71 可插入位点： 5’His4 3’His4 影响目的基因在甲醇酵母中表达的因素 1.目的基因的特性 2.表达框的染色体整合位点与基因拷贝数 3.宿主的甲醇利用表型 4.分泌信号 5.产物稳定性 6.翻译后修饰 1）载体稳定性 同拷贝数时，整合型的比自主复制型的表达水平高 YRp型载体的稳定化： 选择—非选择培养交替数十代可得稳定的整合子，但费时，整合位点不确定。 采用YIp型载体: 更易实现整合、整合位点清楚 2）基因剂量 外源基因表达存在基因剂量效应 筛选多拷贝整合子 载体引入G418/Zeocin抗性标记，整合子拷贝数与抗性成正相关，采用高G418/Zeocin抗性转化子。 体外串联多个表达盒，直接获多拷贝整合子 采用YRp型载体稳定化技术获高拷贝整合子 构建高拷贝整合型表达载体 3）整合位点 外源基因表达盒整合于AOX/MOX或标记基因处，均可高效表达 毕赤酵母中个别情况整合于His4位点的比AOX1位点的低 4）甲醇利用表型 在分泌表达情况下，甲醇慢生长型更利于表达 启动子中的元件可以分为两种： 1）核心启动子元件(core promoter element)　指RNA聚合酶起始转录所必需的最小的DNA序列，包