叶绿素分析仪性能和核查实验操作步骤.pdfVIP

BeijingSentechenvironmentaltechnologyCo.Ltd. BeijingSentechenvironmentaltechnologyCo.Ltd. BBeeiijjiinnggSSeenntteecchheennvviirroonnmmeennttaalltteecchhnnoollooggyyCCoo..LLttdd.. 叶绿素分析仪性能和核查实验操作步骤 引言 国家水质自动监测站新增叶绿素分析仪，为北京利达科信公司Tethys400叶绿素分析 仪器，该仪器采用荧光法原理测定水中叶绿素的浓度，需要用标准样品进行仪器的校准和制 作工作曲线。目前国内尚未开发叶绿素的标准样品与质控样品，进口标样昂贵且难以保存和 运输。为保证叶绿素分析仪器的正常运行，必须解决仪器性能考核和今后日常核查实验所需 的可参考的标准样品问题。为了解决这一问题，本实验中参考大量的科学文献与国内外相关 标准，最终采用经新鲜的绿色菠菜叶用乙醇提取叶绿素样品。叶绿素分析仪进行校准等性能 实验前，在现场利用《水和废水监测分析方法（第四版）》中“叶绿素a的测定”方法测定提 取的叶绿素样品的浓度后，以此浓度为测试母液，逐级稀释，制作叶绿素分析仪的工作曲线 和进行仪器准确度、精密度的实验等。与《水和废水监测分析方法（第四版）》不同的是， 本实验中提取叶绿素样品的有机溶剂选用乙醇而非丙酮，因为考虑到丙酮对叶绿素仪器的光 学系统和管路都有腐蚀性，所以采用乙醇提取菠菜叶中的叶绿素。目前，有大量文献报道了 用乙醇提取菠菜叶中叶绿素的方法，此外，在制定操作步骤前，笔者进行了分别用95%乙 醇和90%丙酮做溶剂溶解叶绿素样品的实验，实验结果表明，同一样品分别用95%乙醇和 90%丙酮做溶剂，测定的结果基本一致。 【材料、仪器、试剂】 1 1 11．材料：绿色植物叶片，本实验中选用绿色菠菜叶为试材。 2 2 22．仪器： (1)WTW-6100便携式分光光度计1台；（2）天平1台；（3）研钵1个；（4）药匙2支；（5）漏 斗1支；（6）5ml刻度移液管1支、10mL刻度移液管1支；（7）胶头滴管1支；（8）剪刀1把； （9）25mL棕色容量瓶1只、100mL棕色容量瓶1只、500/1000mL棕色容量瓶5只；（ 11）10mm 751 751 比色皿1只(775511型)；（12）吸耳球1只；（13）擦镜纸若干；（14）滤纸若干。 3 3 33．试剂（分析纯）： （1）碱式碳酸镁；（2）二氧化硅；（3）95%乙醇。（仪器安装调试时约需500毫升/瓶共15 瓶） 【实验步骤】 一、菠菜叶提取叶绿素样品 1. 将新鲜菠菜叶用清水洗净晾干。 2. 取菠菜叶片中无根无茎部分，剪碎后，称取2g，放入研钵中。 3. 称取碱式碳酸镁0.2g，二氧化硅0.5g，分别倒入研钵中。加入3-5mL95%乙醇，将样品 北京晟德瑞环境技术有限公司 地址：海淀区闵庄路3号玉泉慧谷2号楼, 100195 电话：86（10）传真：86（10） BeijingSentechenvironmentaltechnologyCo.Ltd. BeijingSentechenvironmentaltechnologyCo.Ltd. BBeeiijjiinnggSSeenntteecchheennvviirroonnmmeennttaalltteecchhnnoollooggyyCCoo..LLttdd.. 研磨成匀浆，直至被研磨样品组织发白，静止3~5min 后，用一层干滤纸过滤到25mL 容量瓶中，用胶头滴管吸取95%乙醇将研钵洗净，清洗液也要过滤到容量瓶中，并用95% 乙醇沿滤纸的周围进行洗脱，待滤纸和残渣全部变白后，用95%乙醇定容至刻度。摇匀 后，作为贮备液，避光冷藏保存。 4. 对分光光度计进行纯水调零后，用95%乙醇溶液作为空白，测定浓度记为C 。