小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒使用说明书.PDF

小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：31.2 pg/ml -2000 pg/ml 最低检测限：7.8pg/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠TNF-α，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6 个月 预期应用：ELISA 法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中TNF-α 含量。 说明 物 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 生 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 程 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任 何影响。 方 概述 京 肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）是一种具有多种生物活性的细胞因子。兔子TNF-α 基因编码前体蛋白，其信号肽将前体蛋白固定在细胞膜上，成为具有活性的跨膜干扰素 北 （TNF），分子质量为26×103，经酶切去除信号肽生成分泌型TNF-α，分子质量为17×103。 TNF-α细胞来源广泛，包括各种免疫细胞、内皮细胞、成纤维细胞、表皮细胞、角质细胞、 平滑肌细胞、星形细胞、成骨细胞等。 TNF-α具有广泛的生物学活性，如：参与炎性反应和免疫应答，抗肿瘤，参与内毒素性休 克等病理过程，引起恶病质等。其具有双重作用，,一方面在机体免疫调节，机体生理功能 和抗感染等方面发挥重要作用，另一方面若持续释放或产生过多则会引起发热!、休克、恶 病质等，同时TNF-α可进一步诱导IL-6、IL-8、IL-10 等细胞因子的产生，这些促炎性细胞 因子参与体内急性反应、发热反应、引起趋化肽释放等，还可使内皮细胞活化而导致血管通 透性增加。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗TNF-α抗体的微孔中依次加入标本或标 准品、生物素化的抗TNF-α抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅 和样品中的TNF-α呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓 度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板（Assay plate ）：一块（96 孔）。 物 2.标准品（Standard）：2 瓶（冻干品）。 生 3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。 4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。 程 5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。 方 6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120ul/瓶（1：100） 7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120ul/瓶（1：100） 京 8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。 北 9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。 10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof 管 5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6.蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清：全血标本请于室温放置2 小时或4℃过夜后于1000 x g 离心20 分钟，取上清即可 检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2.血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2 -8° C1000 x g离心15 分钟，或将标