第一章 绪论1.1 基因检测学起源.PDF

第一章 緒論 1.1 基因檢測學起源 ”基因”—這個名詞是在 1909 年首先由丹麥遺傳學家 G. Johansen提出 的，其原意是用以描述生物體某個特別性狀的 抽象術語。然而，隨著近代 生命科學新知的快速演展，”基因” ，這個抽象符碼也就不斷地被賦予更實 切的科學意涵。五０年代後，基因的相關研究開始有了突破性的進展。 A. Hershey和 M. Chase證實了 DNA負責攜帶遺傳訊息，而 J. D. Watson 與 F. H. Crick也藉由 X-ray 繞射技術確定了 DNA的雙螺旋結構，以及鹼基成對 互補的法則[1] ，其相關資料請參考附錄一。 直到 1957 年，Francis Crick發表了基因學說並闡述了基因是如何製造 蛋白質原則後，才讓人們更清楚地瞭解到生物的遺傳、發育、生長等功能 均是由基因所掌控，而先天性的遺傳疾病也是由於基因的序列發生變異所 導致。由於基因是利用鹼基成對互補的法則來精確地傳遞遺傳訊息，因此 基於這項不變的法則，只要透過已知序列的單股 DNA 探針（probe ），我們 就能夠藉由基因雜交 （hybridization ）來搜尋與它互補的另一股 DNA 序列， 而這項基本原理如今廣泛地運用在基因檢測與基因定序上。 1.2 基因晶片的發展歷程 八０年代伊始，研究學者提出了微小化生物晶片的概念。有鑑於當時 基因分析與定序對生命科學研究之重要性，美國史丹佛大學在國家衛生研 究院的資助下，著手進行基因晶片的研發。他們將含有各種不同的單股 DNA 序列探針點在一小片濾紙上，當一股 DNA 序列探針與另外一股互補 的 DNA 序列標靶雜交（hybridization ）時會有很強的結合力。因此，利用 濾紙上已知序列或已知功能的 DNA 探針，即可偵測檢體中未知的 DNA標 靶，此種方法開創了最早的微陣列基因晶片應用技術。 傳統的基因雜交研究，是將一群未知的 DNA標靶（ target ）置放在薄 膜上，而在雜交反應袋中與之反應的標記 DNA 序列是已知的，我們稱為 探針（probe ）。如此，一個雜交實驗只能做一種探針，而探針一次只能研 究一種基因。如果要研究多種探針，只能逐項 進行，不但極為花費時間， 而且也無法深入地探討牽涉到多種基因交互作用的機制。然而反式墨點法 （reverse dot plot ）卻逆其道而行。它是將DNA 探針全部點在薄膜上，每 一點都是不同種的 DNA 探針，並且都是已知序列或功能的基因，並接著 與經過標記的 DNA 標靶進行雜交，標靶可以是一種或多種，可以是已知 1 或未知。如此，一次實驗可以同時研究多種 DNA 標靶。而這種反式的雜 交法也就是基因晶片的前身。 然而，如果需要得到更多關於基因所透露的資訊，那就必須置放更多 不同種類的探針。這就表示需要使用更大的晶片面積與浪費更多的 DNA 原料。綜而觀之，解決之道惟有將探針陣列儘可能地縮小。然而，以八０ 年代當時的工業水準仍然還無法達成這項要求。直到 1994 年，Affymax 公司的 Fodor 等人在玻璃基版上以半導體技術原位（in situ ）合成寡核苷酸 （較短的基因序列，約15～25個鹼基）的微陣列，並成功地應用在雜交 定序（sequencing by hybridization ，簡稱SBH ）及單鹼基複型序列( single nucleotide polymorphism ，簡稱SNP)的檢測上，微陣列基因晶片的夢想才 終於得以實現[2] 。隨後在1995 年，史丹佛大學教授 P. Brown則另外發明了 利用機械手臂佈放 cDNA 序列的點陣法。因為點陣法所需要投入的研發成 本非常低，技術門檻也不高，所以立即掀起了一股發展基因晶片的熱潮。 基因晶片產品以及隨此概念而衍生的各式生物晶片，其種類也益趨多樣化 [1] 。 1.3 基因晶片的應用領域 現在，基因晶片技術已經成功地運用在遺傳基因疾病的研究上。基因 晶片廠商 Affymatrix更推出了 P53 基因的研究晶片組。根據研究，高達三 成的癌症病患都是由於 P53 基因先天的缺陷或是變異，導致細胞無法製造 正常的蛋白質來代謝而罹癌。如果 P53 基因異常，那麼罹患癌症的機率就 比一般人更高。因此P53 基因晶片的問世，無疑地為社會大眾提供了最佳