il1β通过csrc蛋白激酶调控胃腺癌细胞存活及机制的初步研究-primary study on the mechanism of il1β regulating the survival of gastric adenocarcinoma cells by csrc protein kinase.docx

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2018-05-29 发布于上海
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il1β通过csrc蛋白激酶调控胃腺癌细胞存活及机制的初步研究-primary study on the mechanism of il1β regulating the survival of gastric adenocarcinoma cells by csrc protein kinase

目录附录……………………………………………………………………1中文摘要………………………………………………………………3英文摘要………………………………………………………………6前言….………………………………………………………10第一部分IL-1β通过c-Src蛋白激酶增加胃腺癌细胞存活作用的初步研究材料和方法…………………………………...……………………121.实验材料…………………………………………………...…121.1细胞株及细胞培养所需要的材料……………………...…121.2抗体、试剂及其他材料……………………………….….121.3主要仪器……………………………………………….…..132.实验方法……………………………………….…………132.1AnnexinV+PI染色后流式细胞仪测定IL-1β的刺激在胃腺癌MKN-45细胞凋亡中的作用……………………13免疫印迹法（Westernblot）检测胃腺癌细胞中IL-1β对c-Src蛋白激酶的激活作用……………………………14AnnexinV+PI染色后流式细胞仪初步测定c-Src蛋白激酶在IL-1β促进胃腺癌MKN-45细胞存活中的作用...….17结果…………………………..……………………………………181.IL-1β刺激后可减少血清饥饿诱导的MKN-45细胞的凋亡………………………………...…………………….…182.IL-1β可以激活胃腺癌中c-Src蛋白激酶……….…203.c-Src抑制剂PP1可抑制IL-1β刺激所降低的血清饥饿诱导的胃腺癌MKN-45细胞的凋亡……………………..…22讨论……………………………………………..…………………..…25小结………………………………………………..………………..…27第二部分c-Src低表达细胞株的获得以及抑制c-Src的表达对IL-1β促进胃腺癌细胞存活作用的影响材料和方法…………………………………...……………………….281．实验材料…………………………...…………………….…281.1细胞株及细胞培养所需要的材料...…………………….….281.2抗体、试剂及其他材料…………...……………………..….281.3主要仪器……………………………………………...…282.实验方法………………………………………………….…292.1pGPU6/GFP/Neo-c-SrcshRNA表达载体和siRNA阴性对照shRNA(scrambleshRNA)载体……………………….…292.2c-Src低表达的胃腺癌MKN-45细胞稳定克隆的获得….312.3免疫印迹法（Westernblot）检测稳定转染MKN-45细胞克隆中c-SrcshRNA对胃腺癌MKN-45细胞中c-Src的表达抑制………………………………………………..…312.4AnnexinV+PI染色后流式细胞仪测定抑制c-Src蛋白表达后对IL-1β促进胃腺癌MKN-45细胞存活作用的影响………………………………………..…………………..32结果…………………………..…………………………………………331.c-SrcshRNA表达载体的测序结果…………………………332.成功地获得了pGPU6/GFP/Neo-c-SRCshRNA1、pGPU6/GFP/Neo-c-SRCshRNA2低表达和siRNA阴性对照pGPU6/GFP/Neo-ScrambleshRNA稳定转染的MKN-45细胞…………..………………………………………343.抑制c-Src的表达可降低IL-1β诱导的MKN-45细胞的存活……………………..……………………………………36讨论………………………………………………..……………………39小结…………………………………………………..…………………40第三部分初步探究IL-1β激活c-Src蛋白激酶增加胃腺癌细胞存活的机制材料和方法…………………………………...…………………….411．实验材料…………………………...………………..…….411.1细胞株及细胞培养所需要的材料...…...…………………...411.2抗体、试剂及其他材料…………...……………………...….421.3主要仪器………………………………………………..…422.实验方法……………………………………………….……422.1免疫共沉淀试验…………………………………….………42Western-blot法分析MKN-45细胞接受IL-1β刺激后Stat3的活化……………………………………………43AnnexinV+PI染色后流式细胞仪测定抑制Stat3活性后对IL-1β降低胃腺癌MKN-45细胞凋亡作用的影响..