il24泛素化位点突变体抗肿瘤作用的研究-study on antitumor effect of il24 ubiquitination site mutant.docx

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2018-05-29 发布于上海
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il24泛素化位点突变体抗肿瘤作用的研究-study on antitumor effect of il24 ubiquitination site mutant

徐州医学院硕士学位论文I L-24泛素化位点突变体抗肿瘤作用的研究中文摘要目的研究比较IL．24泛素化位点突变体和野生型lL．24对肿瘤细胞HeLa， HepG2的生长抑制作用并初步探讨其机制，为临床应用IL．24泛素化位点突变体治疗恶性肿瘤奠定实验基础。．方法培养宫颈癌细胞株HeLa、肝癌细胞株HepG2，分别用pcDNA3．1、 pcDNA3．1／IL-24和pcDNA3．1／IL．24泛素化位点突变体转染两种细胞株，于不同时间收集细胞。通过CCK-8检测细胞增殖；FITC．Annexin V染色检测细胞早期凋亡； DAPI染色检测细胞晚期凋亡；Western blot检测Bax，Bcl．2的表达和Caspas．3的活化情况。结果1．质粒转染48h后，Western bloti正实pcDNA3．1／IL．24泛素化位点突变体和pcDNA3．1／IL-24组中均表达IL一24蛋白，．KpcDNA3．1／IL一24泛素化位点突变体组 IL．24的表达较pcDNA3．1／IL．24组高(PO．05)，表明对IL．24进行突变后延缓IL．24 蛋白的降解。2．CCK-8结果显示：(1)pcDNA3．1／IL一24泛素化位点突变体和pcDNA3．1／IL·24 对两种肿瘤细胞株均有生长抑制作用，且这种抑制作用随着时间的延长而增加；(2)pcDNA3．1／IL-24泛素化位点突变体组对肿瘤细胞的抑制作用与 pcDNA3．1／IL一24组相比差别有统计学意义(PO．05)，其抑制作用明显大于 pcDNA3．1／IL-24组。3．FITC．Annexin V染色结果显示在肿瘤细胞q3pcDNA3．1／IL．24泛素化位点突变体组和pcDNA3．1／IL一24组均有早期凋亡细胞，gpcDNA3．1／IL．24泛素化位点突变体组早期凋亡阳性率高于pcDNA3．1／IL．24组(P0．05)。4．DAPI染色结果显示在肿瘤细胞qbpcDNA3．1／IL．24泛素化位点突变体组和徐州医学院硕士学位论文pcDNA3．1／IL-24坌f1．均有晚期凋亡细胞，．RpcDNA3．1／IL一24泛素化位点突变体组晚期凋亡阳性率高于pCDNA3．1／IL．24组(尸O．05)。5．细胞转染48d、时后，Western blot检测空白组，pcDNA3．1组，pcDNA3．1／ IL．24组和pcDNA3．1／IL．24泛素化位点突变体组四组中Bax，Bcl．2蛋白表达。就肿瘤细胞而言在检测的四组中，Bax／Bel．2的比值peDNA3．I／IL．24泛素化位点突变体组和pcDNA3．1／11_,-24组是增加的，且pcDNA3．1／IL-24泛素化位点突变体组 Bax／Bcl．2的比值较pcDNA3．1／IL-24组高。6．细胞转染48d,时后，Western blot检测空白组，peDNA3．1组，pcDNA3．1／ IL24组和pcDNA3．1／IL-24泛素化位点突变体组四组中Caspas-3的活化情况。就肿瘤细胞而言在检测的四组中，pcDNA3．1／IL-24泛素化位点突变体组和pcDNA3．1／IL-24 组检测到活化的Caspas一3，_RpcDNA3．1／IL-24泛素化位点突变体组Caspase一3活化量较pcDNA3．1／IL-24组高。结论构建的pcDNA3．1／IL．24泛素化位点突变体延缓I【广24蛋白降解，且与 IL一24相比诱导肿瘤细胞凋亡的作用更强。结果支持IL-24泛素化位点突变体在肿瘤治疗中的作用。关键词泛素化；IL．24；肿瘤；蛋白降解4徐州医学院硕士学位论文Anti．tumor effect of IL一24 mutant in the～natennated sitesAbstractObjective Study the therapic effect of the ubiquitinated sites mutant of IL-24 on tumor cell lins HeLa,HepG2，which offer the reliable basis of experiment whether IL-24 mutant can be used on patients with tumor in clinic．tMethods Tumor cells(HeLa and HepG2)were cultured,then were transfectedwim pcDNA3．1，pcDNA3．1／IL-24 or pcDNA3．1／IL-24 mutant,which were to be collected at the expected time．After that,the prolife