il37b抑制乳腺癌细胞mdamb231体外侵袭和转移能力-il37b inhibits the invasion and metastasis of breast cancer cell md amb 231 in vitro.docx

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日目录主要缩略词表1中文摘要3英文摘要5前言7材料与方法10结果21讨论28参考文献30综述34致谢53主要缩略词表缩略词LPS英文名称Lipopolysaccharides中文名称细菌脂多糖EMTEpithelialmesenchymaltransition上皮间质转换MMP-9Matrixmetalloproteinase9基质金属蛋白酶-9TNF-αTumornecrosisfactor肿瘤坏死因子TGF-βtransforminggrowthfactor-β转化生长因子-βFNfibronectin纤粘连蛋白BSABovineserumalbumin牛血清白蛋白IFN-γinterferon-γ干扰素-γECMExtracellularmatrix细胞外基质CSCcancerstemcells肿瘤干细胞IL-37b抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭和转移能力硕士研究生：张继飞指导教师：冯作化教授摘要目的：IL-37b被发现在三种肿瘤细胞中表达，但其在细胞内的作用以及是否在肿瘤组织和细胞中均表达尚未有研究报道，本研究将探讨乳腺癌MDA-MB-231细胞内的IL-37b对细胞侵袭和转移能力的影响，并初步分析IL-37b影响细胞侵袭和转移能力的分子机制。方法：1）收集2株肿瘤细胞MDA-MB-231和MCF-7，提取总RNA和总蛋白，westernblot检测IL-37b的表达，realtimePCR检测IL-37b的表达。2）利用pCDNA3.1构建真核表达质粒pIL-37b，稳定转染MDA-MB-231细胞，G418筛选阳性表达细胞株，挑取1株阳性细胞株。将筛选获得的阳性的细胞株利用westernblot和realtimePCR进行鉴定。鉴定后的细胞株继续大量培养、保种，用于后面的实验。3）Transwell检测细胞的体外侵袭及迁移能力变化，粘附实验检测肿瘤细胞对整合素配体FN的粘附能力。4）将细胞培养于预先包被marigel的六孔板中，培养48h后，收集细胞与细胞培养上清，realtimePCR检测细胞内MMP9基因的表达，明胶酶谱检测培养液中MMP-9的活性。5）将细胞培养于6孔板中，培养48h后，realtimePCR检测细胞αv、β3基因表达，westernblot检测αv、β3蛋白表达，流式细胞术检测细胞膜表面αvβ3表达指数。6）将细胞培养于六孔板中，48h后，收集细胞培养上清液，ELISA检测培养液中IL-8、IL-6的含量。结果：1）IL-37b在MDA-MB-231和MCF-7细胞中的表达具有显著的差异性，较低侵袭转移能力的MCF-7细胞内IL-37b的表达明显高于高侵袭转移能力的MDA-MB-231细胞。2）MDA-MB-231细胞高表达IL-37b后，其体外侵袭及迁移能力明显下降，对整合素配体FN的粘附能力明显降低，与MCF-7类似。3）MDA-MB-231细胞高表达IL-37b后，能显著的抑制细胞MMP-9的表达以及MMP-9的活性。4）MDA-MB-231细胞高表达IL-37b后，能够抑制整合素αv、β3的表达，同时能够降低细胞膜表面αvβ3的表达。5）MDA-MB-231细胞高表达IL-37b后，能够显著的抑制IL-8和IL-6的表达。结论：IL-37b在肿瘤细胞内，能够抑制与肿瘤细胞侵袭及迁移相关基因的表达，从而抑制肿瘤细胞的体外侵袭及转移能力。关键词：IL-37b，MDA-MB-231，侵袭和转移AbstractObjective:ExpressionofIL-37bwasfoundinthreetypesoftumorcells,butitsroleandwhetherwasitexpressedinthetumortissuesandcellsthatitnotyetbeenstudiedclearly.Thisstudywillinvestigat