考布他汀a4磷酸酯通过notch-cobtatin a4 phosphate ester passes through notch.docxVIP

独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日期：年月目录英文缩略词表1中文摘要2ABSTRACT5前言8参考文献10第一部分考布他汀A4磷酸酯联合吉非替尼对H1975细胞行为学的影响15引言15材料和方法15结果21讨论27第二部分CA4P联合Gef对H1975细胞内Notch-1和Snail蛋白表达的影响.30引言30材料和方法30结果35讨论36全文总结38创新点与展望39参考文献39综述42参考文献46附录50致谢51英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称BSACA4PCIDMSOEGFREMTFBSGefIC50MDRMTTNSCLCPMSFPBSPVDFPISDSTKIBovineserumalbumincytidineCombretastatinA4phosphateCombinationindexDimethylsulfoxideEqidermalgrowthfactorreceptorEpithelial-MesenchymalTransitionFetalbovineserumGefitinib50%inhibitingconcentrationMultipleDrugResistanceMethylthiazolyltetrazoliumNon-SmallCellLungCancerPhenylmethylsulfonylfluoridephosphate-buffered-salinePolyvinylidenefluoridePropidiumIodideSodiumDodecylSulfate-PolyacrylamidegelelectrophoresisTyrosinekinaseinhibitor牛血清白蛋白考布他汀A4磷酸酯联合指数二甲基亚枫表皮生长因子受体上皮-间质转化胎牛血清吉非替尼半数抑制浓度多药耐药性四甲基偶氮唑盐非小细胞肺癌苯甲基磺酰氟磷酸盐缓冲液聚偏二氟乙烯碘化丙啶十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳酪氨酸激酶抑制剂中文摘要肺癌是全世界发病率及死亡率最高的恶性肿瘤之一，其中80%以上为非小细胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer，NSCLC）。吉非替尼（Gefitinib，Gef）是NSCLC治疗中的第一个分子靶向药物，具有特异性强，耐受性好，不良反应少的优点。但多数患者在治疗数月后会产生获得性耐药，导致病情恶化。因此，探讨产生Gef获得性耐药的机制并寻求新的治疗策略是目前NSCLC治疗领域中亟待解决的关键问题。研究显示，Notch-1信号通路与肿瘤的发生、发展及耐药性密切相关，其可通过上皮-间质转化（Epithelial-MesenchymalTransition，EMT）这一途径影响肿瘤的多药耐药。考布他汀A4磷酸酯（CombretastatinsA4phosphate，CA4P）为考布他汀A4（CombretastatinsA4，CA4）的水溶性磷酸盐前体药物，可通过干扰微管蛋白的聚集，选择性地靶向破坏肿瘤血管结构的完整性，从而产生抗肿瘤效应，目前CA4P已进入肿瘤治疗的临床试验阶段。本研究旨在探讨CA4P联合Gef对NSCLC的增殖、凋亡、细胞周期、迁移的作用以及两药联合能否通过抑制Notch-1/Snail信号通路逆转EMT，增加NSCLC对Gef的敏感性，为克服NSCLC治疗中Gef的耐药问题提供新的治疗策略。本研究分为以下两个部分：第一部分目的：探讨CA4P与Gef联用对H1975细胞的增殖、凋亡、细胞周期及迁移的作用。方法：CA4P、Gef单用或两药按不同方式合用，作用于T790M突变耐药的H1975细胞，观察细胞的形态特征；MTT法检测CA4P、Gef单用或两药合用对细胞的增殖抑制作用，并计算其联合指数（Combinationindex，CI），评价不同给药方式产生的效果；流式细胞术检测凋亡率和细胞周期；划痕实验检测细胞的迁移能力。结果：采取不同方式给药以评价两药的