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雷蒙德氏棉hsp70基因家族进化与ghhsp70-family evolution of hsp 70 gene in raymond cotton and ghh sp 70.docx

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雷蒙德氏棉hsp70基因家族进化与ghhsp70-family evolution of hsp 70 gene in raymond cotton and ghh sp 70

独创11声明r.ì,,.4:人;11明,所平坐的学仪立,是在指导教师l指导下,J且过我的努力取得的成果,井且是ílι段,(1可.以.tm川,1习汀λ111f11f/J;il.f11主义山111纪{1:]在iqj(I(J}也力外,itλ1111、uJl他人)).N.D.且1JJ.cl的fiJI)UJ.x.织,也斗、l1;ú丁浙江农十年人.}:琪儿他放(i)L构拔ilj,:/f:uiù:1lílJí业川U.rl!j忖刊.Jf立-1,;J叫本iiJI咒1战tH民献的IdJ忐,ftl;(l:i义11f1:rIj(耐1(nIJ)j{{IJJ?日i志。Ill,fjfr((wift:U把他人川UJ+I((l(jír).J11水人IJ川1[1;;;(i(1让出íf。川门川江22名叫11lUJ论文使用技权的说明O纪时tj.人古/t(fó/(ì-I)rT农村、);.节{f只{注:阳、他JtJ节Fiì企:idl(jí丘.1l11,/:忧{]以.ìr乞it之:(l(rl[-IJíl,允;ltiL挝lr阅fll川址:,;,.t.IJ以公(IJìiλ(r.J/I{f,;X:íi竹的轩,IIJl)_:反川l;t;1一JI、纠;rJ,\(lt他1l1l.ljTf?:íl白论文。(1呼\:,((1[I口自于1仨叮适用水搜十飞机n、1é1:‘(;::{;ii,(Iír104♀;!二斗、11.:Iìt1j(L/)H.I)1J..J);yf忡ifj2叭、(J咄拍圳唰刷1l川μ阳H问问叫叫轨吁圳叶刷山机:圣↓AZ门)例牛,b.6川呛似i叫川11lUl:打论以…它以立期:rJ..?L忆L6摘要摘要棉花是全球重要的纺织原料之一,具有极其重要的经济价值。热激蛋白70家族(HSP70)是一类在进化过程中高度保守的分子伴侣型蛋白,在胁迫和非胁迫情况下帮助蛋白质的正确折叠,并广泛参与植物生长发育的各个阶段。本文通过研究棉花HSP70基因家族的功能,为下一步深入研究棉纤维发育过程中的分子调控机理提供基础,主要结果如下:1.利用隐马可链夫模型(HMM)对雷蒙德氏棉全基因组进行HSP70家族基因预测,共得到30个HSP70家族成员。对GrHSP70基因的结构、染色体分布以及系统进化关系进行生物信息学分析,结果表明,HSP70基因超家族可根据亚细胞定位进行分组,各组中的基因具有相对保守的结构特征和基序分布。通过比较棉纤维发育不同时期的深度测序表达谱数据,发现大量HSP70家族基因可能参于棉纤维的发育过程。2.利用PCR技术克隆到棉花GhHSP70-20基因的全长CDS序列,构建其sGFP融合表达载体,通过基因枪轰击洋葱表皮细胞对棉花HSP70-20基因的的亚细胞定位进行验证,结果表明该基因定位于细胞质中。3.利用RT-PCR研究棉花GhHSP70-20基因转录水平上的表达模式。结果发现,在高温胁迫下,棉花GhHSP70-20表达量增高显著,证明该基因为热响应型HSP70基因。GhHSP70-20基因的表达情况受棉纤维发育不同阶段的调控,在棉纤维发育的伸长期的表达量最高,并且GhHSP70-20基因在野生型材料中表达量高于Li-1突变体材料。4.将棉花GhHSP70-20基因构建超表达载体和反义表达载体,利用农杆菌介导转入法转化拟南芥,获得T2代植株。发现GhHSP70-20基因反义表达植株对盐和ABA的敏感性增强。5.克隆棉花HSP70-20基因的启动子区域,进行顺式作用元件分析,并将1200bp的启动子基因片段利用Gateway技术构造启动子GUS融合载体,农杆菌介导转入拟南芥中,获得T1代植株,进行GUS染色发现,HSP70-20基因的表达具有时空性,在叶脉和角果中表达量较高。关键词:棉纤维,HSP70,基因功能,基因家族,启动子。IIABSTRACTABSTRACTCottonfiberisoneofthemostimportanttextilematerialsontheworld,playsanimportantroleinournationaleconomy.Membersoftheheatshockprotein70(HSP70)classofproteinsareevolutionarilyconservedmolecularchaperones.Theyareinvolvedinproteinproperfolding,bothinunstressedaswellasstressedconditions.Theyarealsowidelyinvolvedinplantgrowthanddevelopmentprocess.ThisstudyprovidesrichinformationofthecottonHSP70genefamilywhichlaysthefound

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