化院2010-08 分子发光分析法.ppt

第8章 分子发光分析法 8.1 概论 8.2 分子荧光与磷光光谱分析法 2.电子激发态的多重度 3.激发态→基态的能量传递途径 非辐射能量传递过程 辐射能量传递过程 荧光、磷光的寿命和量子产率 2.化合物的结构与荧光 2.荧光光谱(或磷光光谱) 3.激发光谱与发射光谱的关系 镜像规则的解释 8.2.1.6 荧光(磷光)强度与溶液浓度的关系 随着溶液浓度的进一步增大，将会出现发光强度不仅不随溶液浓度线性增大、甚至出现随浓度的增大而下降的浓度效应。 8.2.2 荧光、磷光分析仪器 仪器光路图 仪器框图 8.2.2.2 磷光分析仪器 8.2.3 荧光的常规测定方法 8.2.4 磷光测定的方法 8.2.4 磷光测定的方法 8.2.5 荧光、磷光分析法的应用 8.3 化学发光分析法 8.3.4 化学发光的测量仪器 8.1.1 分子荧光与磷光产生过程 3.激发态→基态的能量传递途径 非辐射能量传递过程： 8.1.2 荧光光谱（广义的） （2）激发光谱 8.1.3 荧光光谱的基本特征 8.1.4 荧光的产率与分子结构的关系 2.化合物的结构与荧光 8.1.5 影响荧光强度的因素 5. 荧光猝灭 8.1.6 仪器与结构流程 仪器光路图 8.1.7 荧光分析方法与应用 2.定量依据与方法 （2）定量方法 3.荧光分析法的应用 8.2.1 低温磷光与室温磷光的测量 2.低温磷光的测量 3.室温磷光的测量 （2）溶剂胶束增稳法 溶剂胶束增稳法实例 4. 磷光检测装置 8.2.2 分子磷光法的应用 1. 特点 （1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级 检出限：0.1～0.01 ?g/mL （2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱； （3）试样量少 缺点：应用范围小。 (1) 定量依据 浓度很低时， Ip = kc 标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样，测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。 比较法： 在线性范围内分别测定标样和试样的荧光强度，比较。 (1)无机化合物的分析 与有机试剂配合物后测量，可测量约60多种元素。 (2)生物与有机化合物的分析 见表。 1. 荧光与磷光的不同处 （1）磷光的发光速率较慢，发光速率常数比 荧光的要小得多，但也使得发光寿命比 荧光的长，约在10-4～10 s。 （2）磷光辐射的波长比荧光长。 （3）发光效率受温度影响大。在低温时磷光 强度比高温时大。 8.2 分子磷光法 （1）为什么要在低温下测量 磷光的寿命和辐射强度受温度影响大。 （2）低温测量方法 液氮温度（77 K）下进行。所用溶剂应具有低的磷 光背景，并在77 K下具有足够的黏度，以便能形成 透明的刚性玻璃体，减少磷光的碰撞猝灭。 低温测量：操作不便，受溶剂选择的限制。 如何实现室温测量？有三种方法 基本原则：减少磷光的碰撞猝灭 （1）固体基质法 将磷光物质吸附在固体载体上直接进行测量。 吸附固化后增强了磷光强度。 常用的固体基质：纤维载体(滤纸、玻璃纤维)，无机载体(硅胶、氧化铝)及有机载体(乙酸钠、聚合物、纤维素膜)等。 胶束：在溶液中加入表面活性剂，当浓度达到胶束 临界值时，便相互聚集形成胶束。 室温下磷光分子与胶束形成缔合物，实现溶液中的 室温磷光测定。 环糊精也可与合适的磷光分子形成刚性较好的包含缔合物，用于室温磷光测定。 例：在含有表面活性剂十二烷基硫酸盐的溶液中加入重原子离子Tl(I)和Pb(II)，化学除氧后，溶液中的萘、芘、联苯在室温下可发出很强的磷光； 检出限达10-6～10-7mol?L-1。 例：在重原子溶剂1,2-二溴乙烷存在下，通过形成环糊精-磷光团-二溴乙烷缔合物，其对氧不敏感，室温下可产生很强的磷光，选择性较好. 菲和苊的检出限分别为5?10-13 mol?L-1和1?10-11 mol?L-1。 荧光计上配上磷光测量附件即可对磷光进行测量。在有荧光发射的同时测量磷光。 测量方法： （1）通常借助于荧光和磷光寿命的差别，采用磷光镜的装置将荧光隔开。 （2）采用脉冲光源和可控检测及时间分辨技术。 1.稠环芳烃分析 采取固体表面室温磷光分析法快速灵敏测定稠环芳烃和