荧光 磷光.pptVIP

* 3、荧光分析法的应用 方法 直接荧光法 被测物本身有荧光 被测物与试剂反应后 F与物质的 浓度成正比 荧光猝灭法 被测物使荧光熄灭 由荧光强度降低的强度来测定被测物的含量 间接荧光法 某些阴离子夺取金属络合物中金属 离子，而释放出能发荧光的配位体 催化荧光法 反应速度慢，荧光微弱，难测定 金属离子将加速反应进行 * 磷光分析法 1．如何获得较强的磷光 增加试样的刚性: 低温冷冻 固体磷光法： 吸附于固相载体（滤纸） 分子缔合物的形成： 加入表面活性剂等 重原子效应： 加入含重原子的物质，如银盐等 敏化磷光： 通过能量转移产生磷光 磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动能级 →基态， T1 → S0跃迁； 电子由S0进入T1的可能过程：（ S0 → T1禁阻跃迁） * 荧光计上配上磷光测量附件即可对磷光进行测量。 在有荧光发射的同时测量磷光 磷光分析仪器 应用 * 化学发光分析法 一、基本原理 A +B → C + D* D* → D + h? 某些化合物接受能量而被激发，从激发态返回基态时， 发射出一定波长的光 （1）能够发光的化合物大多为有机化合物，芳香族化合物 （2）发光反应多为氧化还原反应，激发能与反应能相当 ?E=170～300 kJ/mol；位于可见光区 （3）发光持续时间较长，反应持续进行 发光反应如果存在于生物体(萤火虫)中，称生物发光 * 化学发光效率 化学效率： 发光效率： 化学反应所决定 化学反应和环境因素 化学发光强度(单位时间发射的光量子数)： dc/dt是分析物参加反应的速率 * 若化学发光反应是一级动力学反应则 即发光总强度与被测物浓度成线性： 二、化学发光反应类型 1. 直接化学发光和间接化学发光 直接发光 是被测物作为反应物直接参加化学发光反应 ，生成电子激发态产物分子，此初始激发态能辐射光子 A + B? C* + D C* ? C + h? * 间接发光是被测物A或B，通过化学反应生成初始激发态产 物C* ， C* 不直接发光，而是将其能量转移给F，使F跃迁 回基态，产生发光。 A + B? C* + D C*+F? F* + E F* ? F + h? 2. 气相化学发光和液相化学发光 （1）气相化学发光 化学发光反应在气相中进行 主要有O3、NO、S的化学发光反应，可用于监测空气中的 O3、NO、SO2、H2S、CO、NO2等 NO + O3 → NO2* NO2* → NO2 + h? * （2）液相化学发光 化学发光反应在液相中进行 应用最多的发光试剂：鲁米诺（3-氨基苯二甲酰肼）； 鲁米诺在碱性溶液中与双氧水的反应过程： 鲁米诺- H2O2发光反应反应速度慢，可检测低至 10-9 mol/L 的H2O2； * 生物发光 生物发光是化学发光中的一类，特指在生物体内通过 化学反应产生的发光现象，主要由酶来催化产生的。 多种细菌、昆虫、鱼类等均能发光 * 荧光灯：当高压加在灯管两端后，灯管内少数电子高速撞击电极后产生二次电子发射，开始放电，管内的水银受电子撞击后，激发辐射出253.7nm的紫外光，产生的紫外光激发涂在管内壁上的荧光粉而产生可见光。 （可见光的颜色将依据所选用的荧光粉的不同而不同） * 荧光棒中的化学物质主要由三种物质组成：过氧化物、酯类化合物和荧光染料。简单地说，荧光棒发光的原理就是过氧化物和酯类化合物发生反应，将反应后的能量传递给荧光染料，再由染料发出荧光。目前市场上常见的荧光棒中通常放置了一个玻璃管夹层，夹层内外隔离了过氧化物和酯类化合物，经过揉搓，两种化合物反应使得荧光染料发光。 * 三、化学发光的测量仪器 仪器主要包括： 样品室、光检测器、放大器和信号输出装置等部件 * 荧光法测定维生素B2片剂中核黄素含量 一、实验目的： 1．学习和掌握荧光光度分析方法 2．了解荧光分光光度计的结构及使用方法 二、实验原理： 维生素B2结构式 维生素B2，又叫核黄素， 橘黄色,无臭的针状晶体 易溶于水而不溶于 乙醚等有机溶剂 在中性或酸性溶液中稳定 光照易分解，对热稳定 * 维生素B2水溶液在430-440nm蓝光或紫外光照射下 会发生绿色荧光，荧光峰在535nm,在pH=6-7溶液 中荧光强度最大，在pH=11的碱溶液中荧光消失， 所以可以用荧光光谱法测定维生素Ｂ2的含量 三、实验用品： 1．仪器： 荧光分光光度计，移液管，容量瓶，棕色试剂瓶， 比色管，烧杯，离心机，离心管 2．药品：