_嗜热枯草芽孢杆菌TT68产β-甘露聚糖酶发酵条件的优化.docVIP

————————————————————————————————————————————————————— _嗜热枯草芽孢杆菌TT68产β-甘露聚糖酶发酵条件的优化 研究报告 嗜热枯草芽孢杆菌TT68产B-甘露聚糖酶发酵条件的优化 唐荦,唐艳斌,江正强,周鹏 (中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083)* 摘 要 研究了嗜热枯草芽孢杆菌TT68的发酵条件的优化。经碳源、氮源、碳氮比、氨基酸和添加维生素5个单因素发酵条件的优化,得到枯草芽孢杆菌TT68发酵产B-甘露聚糖酶的最适摇瓶发酵培养条件:4g/L魔芋精粉为碳源,017g/L豆粕粉为氮源,碳氮比为6B1,2g/LL-缬氨酸和0175mg/L盐酸吡哆辛。在上述条件下培养6d,胞外B-甘露聚糖酶活性最高,可达7500U/mL。采用5L发酵罐进行放大培养,48h酶活即达到最高,可达9870U/mL。该嗜热枯草芽孢杆菌能利用廉价的碳源和氮源高产甘露聚糖酶,且发酵周期短,在工业化生产甘露聚糖酶中具有很大的应用潜力。 关键词 嗜热枯草芽孢杆菌,B-甘露聚糖酶,发酵,魔芋精粉 甘露聚糖是植物半纤维素的重要组分,是由B- 1,4-D-甘露糖连接而成的线状多聚体,在多糖的侧链 上主要有葡萄糖基、乙酰基和半乳糖基等取代基 团,其来源丰富,在魔芋粉、槐豆胶、沙蒿胶、瓜儿 豆胶中都有不同种类的甘露聚糖存在。B-1,4-D-甘 露聚糖(B-1,4-D-mannanmannohydrolase;EC13121 1178),简称B-甘露聚糖酶(B-mannanase),是一类能 够水解含有B-1,4-D-甘露糖苷键的甘露寡糖和甘露 多糖的内切水解酶,广泛存在于动物、植物和微生物 [2-3]中,其中微生物来源的B-甘露聚糖酶具有活性 高、成本低、来源稳定、提取方便等显著特点,具有广 阔的应用前景。 B-甘露聚糖酶的研究始于20世纪50年代末,早 期的研究着重于产酶菌株的筛选、酶的分离纯化以及 酶学性质,并将其作为工具酶应用于天然多糖类物质 糖链结构的分析,1980年代B-甘露聚糖酶的研究开 始向应用和产业化方向发展。迄今,微生物发酵 产B-甘露聚糖酶的研究主要集中于黑曲霉菌(Asper- gillus)和芽孢杆菌(Bacillus),而芽孢杆菌中研究较 多的是枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、地衣芽孢杆 菌(Bacilluslicheniformis)和嗜碱芽孢杆菌(alkalo- philicbacillussp.),且以枯草芽孢杆菌产酶活性最高。 国内有关微生物产B-甘露聚糖酶的报道也以中温微 生物为主:枯草芽孢杆菌SA-22以魔芋胶为碳源,酵 母膏为氮源25e下液态发酵培养,其产酶水平为223 第一作者:硕士研究生(江正强教授为通讯作者)。 *国家/8630计划课题(No.2006AA10Z337)部分内容 收稿日期:2009-11-20,改回日期:2009-12-29[4-5][1]U/mL。芽孢杆菌M-21以瓜儿豆胶为碳源32e下液态发酵培养,其产酶水平为1487U/mL。嗜热枯草芽孢杆菌WY45和WY34以魔芋粉为碳源,牛肉蛋白胨和酵母提取物为氮源在50e条件下液体发酵培养,其产B-甘露聚糖酶的能力分别为2800U/mL和1105U/mL[8-9][7][6]。可见,微生物发酵产甘露聚糖酶的水平仍较低,且生产成本较高。在前期研究基础上,本研究室筛选得到1株高产B-甘露聚糖酶的嗜热枯草芽孢杆菌TT68,本文主要研究嗜热枯草芽孢杆菌TT68的摇瓶发酵条件及5L发酵罐放大,为工业生产甘露聚糖酶提供依据。1 材料与方法111 菌株和试剂枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)TT68菌株由本研究室从土壤中筛选保存。酵母提取物、胰蛋白胨为英国Oxoid公司产品,槐豆胶为美国Sigma公司产品,其他试剂为国产分析纯。魔芋粉购自武汉清江魔芋公司。112 出发产酶发酵培养基及发酵条件平板培养基(g/L):槐豆胶5,酵母提取物3,牛肉膏蛋白胨2,KH2PO41,MgSO4#7H2O0125。种子培养基(g/L):酵母提取物5,胰蛋白胨10,NaCl10。产酶发酵培养基(g/L):槐豆胶20,牛肉蛋白胨10,KH2PO45,MgSO4#7H2O016。摇瓶发酵条件为:在250mL三角瓶中装入50mL发酵产酶培养基,接种量1%(V/V),在50e恒温 空气浴摇床上以200r/min振荡培养3d。