邻苯二甲酸二-di - phthalate.docxVIP

缩略语表缩略词英文全称中文全称BSABovineSerumAlbumin牛血清白蛋白CK-7Cytokeratin7角蛋白-7邻苯二甲酸二-(2-乙基DEHPDi-(2-ethylhexyl)phthalate己基)酯E2Estradiol雌二醇EDCendocrinedisruptingchemical内分泌干扰物EVTsextravillouscytotrophoblasts绒毛外滋养细胞FDAtheFoodandDrugAdministration食品和药品管理局FGRFetalgrowthrestriction胎儿生长受限FNFibronectin纤粘连蛋白HCGHumanChorionicGonadotropin人绒毛促性腺激素HLA-GHumanLeucocyteAntigenG人类白细胞抗原GHPLHumanPlacentalLactogen胎盘催乳素IDInhibitorofDNABindingandDifferentiationDNA结合和分化抑制剂LD50MedianLethalDose半数致死量LNLaminin层粘连蛋白邻苯二甲酸单(2-乙基MEHPMono-2-ethylhexylphthalate己基)酯MMPsMatrixmetalloproteinases基质金属蛋白酶mRNAMessengerRNA信使RNAPProgesterone孕酮PCRPolymeraseChainReaction多聚酶链式反应PPPeroxisomeProliferator过氧化物酶体增殖物PPARPeroxisomeProliferator-activatedReceptors过氧化物酶体激活受体PVCPolyvinylchlorid聚氯乙烯RTReverseTranscription逆转录STSynotrophoblast合体滋养细胞TUNELTerminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateduridinenucleotideendlabeling末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记VCTsvillouscytotrophoblasts绒毛滋养细胞邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯的雌性生殖毒性研究博士研究生：王心导师：尚丽新教授北京军区总医院妇产科，北京100700中文摘要邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯（DEHP）作为一种增塑剂被广泛添加在各种塑料制品和化妆品中，含量最高可达30%。目前DEHP已经形成了比较严重的环境污染，在全球几乎所有的海洋、大气、饮用水、植物及动物体内都可不同程度地被检出，它对人体的毒性作用越来越受到人们的关注。由于大量使用化妆品及洗漱用品，女性DEHP的暴露几率远高于男性，由于妊娠期对有害因素的影响更为敏感，因此有必要深入研究DEHP对女性生殖系统的不良影响。流行病学调查显示流产、子痫前期及胎儿生长受限等不良妊娠结局与邻苯二甲酸酯暴露密切相关。胎盘位于母胎界面，是胎儿对外来物质发生反应的第一线，对妊娠的发生和维持有重要的作用。我们推测胎盘滋养细胞可能是邻苯二甲酸酯重要的靶细胞，从DEHP作用后滋养细胞相关生物学功能的改变入手，就有可能抓住DEHP影响生殖健康的主要环节。本课题拟通过以下四部分实验，探讨DEHP对体外培养滋养细胞的作用及机制，并通过动物实验，探讨DEHP的雌性生殖毒性。实验一早孕绒毛外滋养细胞的分离、鉴定和培养【目的】建立分离正常早孕绒毛组织获得高纯度的绒毛外滋养细胞（EVTs）的方法，并对其进行鉴定和培养。【方法】无菌条件下获取人工流产早孕绒毛组织，经机械剪碎后通过温和的酶消化方法获得滋养细胞，经1.25-2.5%BSA密度梯度沉降法纯化EVTs。将分离纯化后EVTs接种在Matrigel包被的细胞板上培养。用免疫细胞化学方法，进行CK-7、HLA-G和波形蛋白检测，荧光显微镜下观察鉴定EVTs。【结果】经分离纯化后的EVTs体积较大，呈不规则多边形，核大，胞浆丰富。细胞呈单片状聚集生长，但彼此并不融合。EVTs在Matrigel包被的细胞板上生长状态良好，接种于未包被Matrigel的细胞板上的细胞大多数在24h内死亡。CK-7、HLA-G在EVTs胞浆和胞膜上阳性表达，EVTs内无波形蛋白表达。成纤维细胞胞浆内可见波形蛋白表达，但CK-7和HLA-G不表达。分离的细胞中EVTs数量超过95%。【结论】用温和的酶消化法和BSA密度梯度沉降法可获得的高纯度EVTs。Matrigel是EVTs体外培养过程必要条件。EVTs在包被Matrigel的细胞板上生长状态良好，特征性蛋白CK-7和HLA-G表达阳性。实验二DEHP对绒毛外滋养细胞浸润能力的影响及其机制【目的】探讨DEHP对原代培养人早孕绒毛外滋养细胞浸润能力的影响