IL1β对人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC5ACmRNA表达影响.docVIP

IL1β对人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC5ACmRNA表达影响 　　【摘要】 目的 探讨IL?1β对鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC5ACmRNA表达的影响。方法 在培养的第二代人鼻黏膜上皮细胞加入IL?1β(10ng/ml)刺激24 h后，采用荧光定量巢式RT?PCR检测人鼻黏膜上皮细胞中MUC5AC mRNA的定量表达。结果 在培养的鼻黏膜上皮细胞上检测到MUC5ACmRNA的表达，IL?1β刺激组MUC5ACmRNA定量表达 ［(4?60±1?89) 10??8?拷贝/μg］均高于对照组［(2?50±1?40) 10??7?拷贝/μg］，差异具有统计学意义(P 　　【关键词】 　　白细胞介素1β；黏蛋白；RT?PCR 　　Effects of MUC5AC gene expression in human nasal epithelial cells lnduced by lnterleukin?1beta 　　HUANG Xue?kun， LI Yuan， LIU Hong, et al.Department of Otorhinolaryngology, the Third Affiliated Hospital of Sun Yat?Sun University, Guangzhou, 510630,China 　　【Abstract】 Objective To demonstrate the effects of IL?1β on MUC5AC gene expression in cultured human nasal epithelial cells? Methods In passage?2 cultured human nasal epithelial cells, the mRNA levels of MUC5AC gene expression induced by IL?1β were determined by Fluorescent quantitative nested RT?PCR? Results MUC5AC mRNAs were detected after 24 h of exposure to IL?1β? MUC5AC mRNA levels in IL?1β treatment ［(4?60±1?89) 10??8?copy/μg］] were significantly higher than control ［(2?50±1?40) 10??7? copy/μg］ (P［1］，但黏蛋白MUC5AC的调节机制尚未明了。白介素1β(Interleukin?1beta，IL?1β)主要由活化的单核巨噬细胞产生，是一种重要的具有多种功能的前炎症细胞因子，在急性和慢性炎症中起重要作用，在CRS的上颌窦黏膜也检测到IL?1βmRNA表达增高［2］。本研究在培养的人鼻黏膜上皮细胞IL?1β刺激后，采用荧光定量巢式RT?PCR检测鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC5ACmRNA表达，探讨IL?1β对黏蛋白MUC5ACmRNA表达的影响。 　　 　　1 资料与方法? 　　 　　1?1 鼻黏膜上皮细胞原代培养和传代培养 　　下鼻甲黏膜组织来自我科行鼻中隔手术患者(术前已征得患者同意)，近期无应用糖皮质激素、抗组胺及抗生素药物史，无阿司匹林耐受不良、无哮喘病史。胎牛血清培养基配方、无血清培养基配方、鼻黏膜上皮细胞原代培养和传代培养方法同前［3］。术中取下鼻甲黏膜组织放入胎牛血清培养基的无菌离心管。在无菌室超净工作台里，以无齿小镊将黏膜??夹到烧杯里，抗生素液(含100 IU/ml青霉素、100 μg/ml链霉素的0?9％生理盐水)冲洗6~7遍，5 min/次。剪碎组织，加入0?1％胶原酶(Cibco公司)，量为组织块体积的5倍，37°消化30 min。离心1000 r/min5 min，弃上清。沉淀中加入3 ml血清培养基，滴管吹打，加入培养瓶中，于37°5％ CO?2培养箱培养。培养24 h后吸取2/3的上清液弃去，更换为无血清培养基。原代培养第3天后，倒置显微镜观察，见大部分细胞贴壁，呈现鹅卵石隔日更换无血清培养基，放入37℃ CO??2?培养箱。黏膜上皮细胞生长，汇合成片时则需要传代。以吸管吸去旧的培养液，加无菌Hanks液洗细胞两遍。加入0?25%胰蛋白酶约50 μl/cm??2?,以恰好覆盖细胞为宜。在倒置显微镜下观察，当细胞质回缩，表示细胞脱落，90％细胞质回缩，细胞间隙增大后，轻轻吸去消化液，加入血清培养液，轻轻吹打，制成细胞悬液，以适当浓度种植到培养瓶中，置5％ CO?2培养箱中培养。培养24 h后更换为无血清培养基。? 　　1?2IL?1β刺激培养的鼻黏膜上皮细胞