沈恩健-第一章第2节基因工程的基本操作程序.ppt

复习巩固 ①有启动子 ②有终止子 ③有复制原点，可以遗传给下一代 ④有标记基因等 ⑤能插入目的基因 （有1~多个不同的限制酶切点） ⑥对受体细胞无害，在受体细胞中稳定存在 ①方法：显微注射技术 ②基本程序： * 一、①“DNA分子手术刀” 。 ②“DNA分子缝合针” 。 ③“DNA分子运输车” 。 “限制酶 ” “DNA连接酶” 质粒等 DNA重组技术的基本工具 二、 1．限制酶作用特点：能识别DNA________ ， 并使特定部位的两个核苷酸之间的 ________ 断开，作用结果：产生_____末端或____末端。 特定的核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性 平 2、DNA连接酶的作用部位： 。 种类： 。 其中只能连接黏性末端的酶是 。 磷酸二酯键 E·coli DNA连接酶、T4 DNA连接酶 E·coliDNA连接酶 3．基因运载体——“分子运输车” (1) 常用种类：____、噬菌体的衍生物 ______ 。 (2)作用原理：携带外源基因的质粒(载体)进入受体 细胞后，停留在细胞内进行________，或整合到 染色体上，随之同步复制。 质粒 动植物病毒 自我复制 第二节、基因工程的基本操作程序 一、基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 1、目的基因的获取： （1）含义：目的基因是人们所需要转移或改造 的基因。 （2）类型：①编码蛋白质的结构基因。 ②具有调控作用的因子。 （3）获得目的基因的方法 ①从已有物种分离出目的基因 ④用化学方法直接人工合成目的基因 ②从基因文库中获取目的基因 ③应用PCR技术扩增目的基因 （3）获得目的基因的方法 构建基因文库 （2）从基因文库中获取目的基因 ①基因文库和部分基因文库、基因组文库的含义 ②基因组文库和cDNA文库的主要区别 ③怎样从基因文库中找到我们所需要的目的基因 基因文库 基因组文库 部分基因文库（例如： cDNA文库） ①从已有物种分离出目的基因 ④用化学方法直接人工合成目的基因 ②从基因文库中获取目的基因 ③应用PCR技术扩增目的基因 （3）获得目的基因的方法 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________、 _______________、___________ 、 __________ _. ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 多聚酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 耐热的DNA聚合酶（例如：Taq酶） 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 (二)利用PCR技术扩增目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 （1）原理: DNA双链复制 （2）前提: 要有一段已知 目的基因的脱氧核苷酸序列，以便合成引物。 * * 2、PCR与细胞中的DNA复制的不同点： （1）、PCR中没有用到DNA解旋酶，而是高温条件 （2）、PCR用到热稳定的DNA聚合酶。 3、PCR技术的应用 ①从已有物种分离出目的基因 ④用化学方法直接人工合成目的基因 ②从基因文库中获取目的基因 ③应用PCR技术扩增目的基因 （3）获得目的基因的方法 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 2、基因表达载体的构建——基因工程的核心 2、作为基因表达载体需具备的条件： 一、基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 3、将目的基因导入受体细胞 （1）.将目的基因导入植物细胞 （2）.将目的基因导入动物细胞 （3）