WDR与MLL相互作用分子机制.ppt

WDR5与MLL1相互作用分子机制 李新 2008.11.28 组蛋白修饰 严谨的实验设计 MLL1 core complex MLL MLL1:属于SET1家族，具有甲基转移酶活性；MLL1(mixed linkage leukemia 1)是急性淋巴母细胞白血病致病基因, 具有H3-K4甲基转移酶的功能，通过与染色质重塑复合体SWI/SNF中的INI1(integrase integrator 1)相互作用，激活基因表达，引起白血病和其他恶性肿瘤。 WDR5 WDR5:WD基元又称Trp-ASP或WD40,由40个左右的氨基酸残基组成,具有保守的GH和WD序列. WD重复蛋白(WD-repeat protein)是含有多个保守的WD基元的蛋白质. WD40是一个重要的结构域，参与多种细胞功能的调节，如细胞凋亡、转录抑制等等。WDR5是一种含有WD40的蛋白，它是近来被发现能够识别二甲基化组蛋白（Dimethylated H3K4）的新的结构域。 RBbP5 成视网膜细胞瘤结合蛋白5 ASH2L 低等生物如酵母的SET1蛋白复合体中，有两个成员分别包含了PHD和SPRY结构域，而在高等生物如果蝇中，该两个基因融合成一个基因即ASH2,而ASH2L正是ASH2的同源基因。同时研究已经明确了人SET1复合体的三个重要成员，其中均包括ASH2L。 有文献表明AS2L在K562所代表的一类白细胞分化调控中起重要作用。人ASH2L基因定位与8P11.2 34KB CDNA编码628AA. ASH2在低等生物同源基因的研究表明，其与果蝇幼虫晚期视盘(imaginal-disc)发育相关，这是该基因名称ASH2（absent small or homeotic discs 2）. ASH2L在血液系统中高表达，特别是在白血病来源的肿瘤细胞系中高表达，如K562.当用PMA（佛波脂）诱导后，其表达先短暂升高，然后持续下降。因而该基因的功能可能与血液干细胞分化相关，进而与白血病的发生，特别是髓系急性白血病密切相关。 研究成果 通过点突变来确认在相互作用中的关键部位 基本实验技术 实验假设的提出与验证 WDR5与MLL1的N-SET域形成稳定的复合结构 WDR5 识别MLL1 N-SET区包含精氨酸的保守序列 WDR5 精氨酸结合口袋 对WDR5与MLL1相互作用是必须的。 MLL1 Win基序衍生多肽破坏WDR5 MLL3745复合物 MLL1 R3765的识别对MLL1核心复合物的组装和酶活力至关重要 MLL1 Win 多肽特异的抑制了MLL1核心复合物的 H3K4二甲基化能力 第一个假设（hypothesis）的提出 一 WDR5与MLL1的N-SET域形成稳定的复合结构 MLL3745 MLL3181 WDR5离心沉降图 MLL3181 WDR5离心沉降分布图 第二个假设（hypothesis）的提出 WDR5 识别MLL1 N-SET区包含精氨酸的保守序列 S3763A,E3767A,R3765A MLL1与WDR5相互作用 第三个假设（hypothesis）的提出 WDR5点突变 突变型WDR5 与MLL3745相互作用离心沉降分布图 CD与离心沉降摩擦系数比较 Y191F WDR5与MLL3745相互作用 第四个假设（hypothesis）的提出 Win peptide对WDR5-MLL3745影响 第五个假设（hypothesis）的提出 野生型和R3765A MLL3745 与W，R， A组装能力 另一项研究表明，野生型MLL3745,W,R,A可以很容易的组装成为MLL1核心复合物。离心沉降速度分析表明，这几种组分可以形成180KD ，沉降系数为5.01的复合物，并且其摩尔比为1：1：1：1。 酶活力测定表明，在相互作用蛋白不存在的情况下，野生型的MLL3745 是一种慢的的单甲基转移酶，而当WDR5，RBBP5,AS2L存在的情况下，就变为一种快速的二甲基转移酶。然而，当主要组分一R3765A MLL3745混合后，离心沉降速度实验却没有检测到沉降系数为5的复合物。 第六个假设（hypothesis）的提出 S91K F133A与MLL3745相互作用离心沉降分布 在MLL3745不存在的情况下，WDR5 F133A-RbBP5-Ash2L亚复合物的沉降系数类似与野生型的亚复合物4S。这些结果表明，MLL1核心复合物中WDR5 MLL1的相互作用被显著减弱，当WDR5 F133替换为A，同时野生型MLL1核心复合物的二甲基化活性降低约80%。这些结果提示，MLL1与MLL核心复合物的组分WDR5的相互作用以及其催化H3K4二甲基化的能力有关联。 相反，采用Y191F WDR5 来形