大菱鲆迟缓爱德华氏菌抗体检测试纸条研制及应用-development and application of pap for physical examination of edwardsiella tarda in turbot.docxVIP

鱼类无交叉反应，与鲈鱼、六线、黑鮶、红鳍东方鲀、牙鲆五种海水鱼类血清有一定的交叉反应，但与大菱鲆的血清的反应最为强烈，效价为1:1.024×106，对纯化大菱鲆免疫球蛋白的灵敏度为32ng/ml，表明该单抗具有良好的灵敏性和特异性，可以用于试纸条的制备。3.抗迟缓爱德华氏菌抗体胶体金检测试纸条的研制及应用采用柠檬酸钠还原法制备胶体金，通过肉眼观察及紫外分光光度计扫描，制备的胶体金颗粒均一，直径为30nm。将胶体金调至弱碱性，用制备的胶体金标记单抗，最佳标记浓度为10μg/ml，并采用Dot-Elisa法检测金标抗体，结果显示金标抗体能与抗迟缓爱德华氏菌抗体反应。用X-only单向喷点仪将金标抗体均匀喷洒于用10%牛血清白蛋白处理过的玻璃纤维素膜上，干燥后制得金标垫。同时用喷点仪将迟缓爱德华氏菌破碎液上清及葡萄球菌A蛋白分别点射于硝酸纤维素膜(NC膜)上形成检测线和对照线，组装成试纸条。对所研制的迟缓爱德华氏菌抗体检测试纸条进行重复性、稳定性、特异性及灵敏度检验试验，并与ELISA结果对比。结果显示阳性与阴性的符合率均为100%，且稳定性好，特异性高，对制备的迟缓爱德华氏菌抗血清灵敏度为1:102400，与ELISA的结果一致，并且试纸条与溶藻弧菌、河流弧菌、创伤弧菌、鳗弧菌、哈维弧菌、嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌抗血清均不发生交叉反应。试验证明迟缓爱德华氏菌抗体检测试纸条的检测效果与