(生化工程课件）16 沉淀法教程文件.pptVIP

16 沉淀法;知识点：盐析法，等电点沉淀法，有机溶剂 沉淀法，非离子型聚合物沉淀法,聚电解质沉淀法, 金属离子沉淀法。 重点：上述几种沉淀方法的概念、原理及其适用范围；盐析法的影响因素对沉淀效果的影响，并能根据实际情况予以灵活应用和选择。 难点：常用沉淀方法的灵活运用。;根据沉淀剂的不同; 1．盐析法 多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。 　　2．有机溶剂沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。 　　3．等电点沉淀法 用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。 　　4．非离子多聚体沉淀法 用于分离生物大分子。 　　5．生成盐复合物沉淀 用于多种化合物，特别是小分子物质的沉淀。 　　6．热变性及酸碱变性沉淀法 用于选择性的除去某些不耐热及在一定PH??下易变性的杂蛋白。 ;16.1 盐析法;β和Ks的物理意义;pH值和温度的影响;用盐析分离蛋白质方法;阴阳离子盐析效果;;16.1.2 pH和温度的影响;β值，Ks 温度;16.1.3 (NH4)2SO4 盐析法实际应用时的注意点;先除去杂蛋白，然后在较高的饱和度下，沉淀目标蛋白，操作步骤如下;　;;16．1.4　起始浓度的影响;;16.1.5 盐析的机理;16.4 蛋白质盐析;蛋白质胶体溶液的稳定性;盐析过程;;;;　16.2 等电点沉淀;;（1）适用于疏水性强的蛋白 （2）中性盐浓度增大时，等电点向偏 酸方向移动，溶解度增大 （4）价廉价，无毒 （5）蛋白对低pH 敏感，易失活;由于在等电点附近，溶质仍然有一定的溶解度，等电点沉淀法往往不能获得高的回收率，因此等电点沉淀法通常与盐析、有机溶剂沉淀法联合使用 操作时的注意事项： （1）由于无机离子的影响，蛋白质的等电点通常会发生“漂移”，阳-高，阴-低 （2）溶质的稳定性 （3）盐析效应; 16.3 有机溶剂沉淀法;常用的有机溶剂沉析剂 乙醇：沉析作用强，挥发性适中，无毒常用于蛋白质、核酸、多糖等生物大分子的沉析； 丙酮：沉析作用更强，用量省，但毒性大，应用范围不广； 特点： 介电常数小，60%乙醇的介电常数是48 丙酮的介电常数是22 容易获取 ;有机溶剂中的蛋白质沉淀;有机溶剂沉淀法的优点;溶剂选择;有机溶剂沉淀时，应注意点;16.4 非离子型聚合物沉淀法;16.5 聚电解质沉淀;;16.9 金属离子沉淀;Zn 离子沉淀尿激酶;硫酸铵溶解尿激酶锌络合物;思考题：